W przypadku białek rekombinancji często występuje oksydacja niewykrytych łańcuchów bocznych aminokwasów, takich jak tryptofan (Trp) i metionina (Met), co zmienia właściwości fizykochemiczne białek. Te zmiany mogą z kolei wpływać na modyfikację funkcji biologicznych dotkniętych białek, takich jak utrata wiązania, obniżenie aktywności enzymatycznej, nieoczekiwane szybkie wyczerpywanie się. Białka są ważnymi celami reakcji utleniania, ponieważ reagują szybko z utleniaczami i są obficie obecne w komórkach, tkankach pozakomórkowych i płynach ciała.
Dlatego monitorowanie utleniania białek jest kluczowe dla udanego rozwoju biopreparatów.
Yaohai Bio-Pharma oferuje usługę analizy oksydacji aminokwasów, która pozwala określić oksydację aminokwasów za pomocą chromatografii ciekłej ze sprzętem mass-spektrometrycznym (LC-MS).
Byliśmy zaangażowani w badania struktury białek różnych dużych cząsteczek, w tym szczepionek podjednostkowych rekombinacyjnych, nanociał, VHHs/antytela jednodomkowe (sdAbs), fragmenty antybiotyków, hormonów/peptydów, cytokin, czynników wzrostu (GF), enzymów, kolagenu itp.
Wymagania normatywne dotyczące utleniania kwasów aminokwasowych
Zgodnie z wytycznymi ICH Q6B, utlenione formy mogą być wykrywane i charakteryzowane metodami chromatograficznymi, elektroforetycznymi i/lub innymi odpowiednimi metodami analitycznymi (np. wysokowydajna ciekła chromatografia (HPLC), elektroforeza kapilarna, spektrometria mas, cyrkularna dyshroizm).
Metody analityczne
| Analizy |
Metody |
| Oksydacja kwasów aminokwasowych |
LC-MS, wysokowydajna ciekła chromatografia fazą odwracaną (RP-HPLC) lub wysokowydajna ciekła chromatografia oddziaływaniem hydrofobowym (HIC-HPLC) oraz spektrometria mas |
Procedury analityczne
1. Przygotowanie próbek
2. LC-MS
3. Analiza danych
Rezydujące tryptofany (Trp) są szczególnie podatne na utlenianie z powodu wysokiej reaktywności aromatycznego indolu z gatunkami reaktywnego tlenu. Utlenianie Trp wymaga pewnego wystawienia rezydujących Trp, które zwykle znajdują się ukryte w trójwymiarowej strukturze białka.
Jednakże, gdy rezydujące Trp są utleniane, mogą one przekształcić się w różnorodne produkty o bardzo odmiennych właściwościach od pierwotnego Trp. Najczęstsza ścieżka utleniania Trp obejmuje tworzenie N-formylkinureny (Różnica masy: +32).
Innym często utlenianym aminokwasem jest metionina. Atom siarki w rezydencie Met może przyjąć jeden lub dwa atomy tlenu, co prowadzi do tworzenia sulfoksydów (Różnica masy: +16) lub sulfonów (Różnica masy: +32), odpowiednio. Ta modyfikacja jest względnie powszechna ze względu na zwykle wysokie wystawienie Met na powierzchnię.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
