Savrupaugstošais mRNA (saRNA), kas arī pazīstams kā replikons RNA, kodē in vitro transkripcijas (IVT) mRNA sekvenču un vīrusa replikāzējošo ģenūs, kas iegūti no alfa vai flavi vīru. Vīrusa replikāzējošie ģeni atvieglina savrupaugstošo mRNA procesu, kas rezultātā ir palielinātais proteīna izteicējs un minimālais nepieciešamais RNA daudzums salīdzinājumā ar neaugstošiem mRNAs. Vēl viens aspekts ir tas, ka saRNA ir relatīvi liels molekuls (vairāk nekā 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma ir izveidojusi sarakstu ar mRNA sintēzes tehnoloģijām, lai nodrošinātu neaugstošo mRNA un savrupaugsnošo mRNA (1000 nt~14000 nt), piemēram, sekvence dizaina un optimizācija, IVT, tīrīšana, liofilizācija un lipīdu nanocilindru (LNP) kapsulēšana. Visi produkti tiek atbrīvoti, cienot stingrus kvalitātes kontroles standartus.
Zīm.1 IVT mRNA struktūras īpašumi: konvencionālā, apļveida un pašauginās mRNA.
Pašauginājamo RNA sastāvā ir četri nestrukturālie olbaltumvieli (apzīmēti kā nsP1, nsP2, nsP3 un nsP4), kas atrodas alfavīrusos, Venezeles lopputenes encefalītā virusā (VEEV). Starp tiem nsP1 parāda divkāršus enzīma aktivitātes veidus, proti GTazei un N7MTazei, savukārt nsP2 ir ar RTPazu aktivitāti, kas ir galvenā capping procesam IVT mRNA, lai radtu Cap 0 struktūru. Turklāt nsP2 darbojas kā proteīzs un helicējs, ļaujot izstrādāt veselo nsP kompleksu. nsP3 precīzā funkcija joprojām nav pilnībā izpētīta, tomēr tas intercējas ar dažādiem mazgala šūnu olbaltumvielām, tādējādi samazinot mazgala antivīrusa reakciju.
Alfavīra subgenomālais promotoru (SGP) reģions atrodas pirms interešu gena (GOI). SGP elements ļauj sākt GOI transkripciju, apklājot virsmai nsP białeļu kodējošās sekas lasīšanu.
Fig.2 eGFP saRNA sintēze un klētu veiksmes Yaohai Bio-Pharma RNASci Platformā.
SaRNA sintēzes protokols ir līdzīgs mRNA: Pielāgota mRNA sintēze