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ペプチドマッピング

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ペプチドマッピング

液相クロマトグラフィー-質量分析法（LC-MS）に基づくペプチドマッピングデータは、ネイティブタンパク質および再構成タンパク質の一次構造および高次構造に関する大量の情報を提供します。これには、アミノ酸配列カバレッジ、翻訳後修飾（PTMs、例えば、糖鎖化、酸化、脱アミダ化）、二硫化結合などがあります。

薬海バイオファーマは、あなたのターゲットタンパク質のLC-MSによるペプチドマッピング解析サービスを提供し、タンパク質構造に関する研究を加速させます。

私たちは、再構成サブユニットワクチン、ナノボディ/VHH/単一ドメイン抗体（sdAbs）、抗体断片、ホルモン/ペプチド、サイトカイン、成長因子（GF）、酵素、コラーゲンなどを含む様々な大型分子のタンパク質構造特性評価に携わってきました。

ペプチドマッピングに関する規制要件

ICHQ6Bガイドラインでは、「製品を適切な酵素または化学薬品を使用して個別のペプチドに選択的に分解し、得られたペプチド断片をHPLCまたはその他の適切な分析手順で分析する。ペプチド断片は、アミノ酸組成分析、N末端配列決定、または質量分析法（MS）などの技術を使用して、可能な限り識別すべきである。適切に検証された方法による有効成分または医薬品（DP）のペプチドマッピングは、バッチリリースのために望ましい製品構造を確認するためによく使用される方法である」と推奨しています。

分析方法
分析 方法
ペプチドマッピング プロテアーゼ消化および液体クロマトグラフィー-質量分析法（LC-MS）
分析手順

1. 還元およびアルキル化

目的は、二硫化橋を還元し、生成された自由チオールをブロックすることです。二硫化橋の還元は、タンパク質の構造を開き、 proteolytic digestion（加水分解）をより効率的にします。また、多鎖タンパク質で二硫化橋によって鎖が連結されている場合（例: モノクローナル抗体、mAbs）、このステップでは鎖間の橋も破壊されます。

2. 酵素を使用したタンパク質の消化

目的は、タンパク質をペプチドに分解することです。私たちは、タンパク質の理論的な配列と、酵素によるタンパク質の理論的な消化に関する知識に基づいて酵素を選択しました。この方法で酵素を選ぶことにより、最適なペプチドマッピング分析が得られるはずです。

3. 消化されたペプチドの分析 オンライン逆相-高出力液体クロマトグラフィーを用いた分析で、紫外線（UV）検出とエレクトロスプレー-質量分析検出（LC/ES-MS）を行います。

LC（逆相-LC）を用いた極性に基づくペプチドの分離

ペプチドがLCカラムから溶出する際、質量分析計はフラグメントイオン情報と共に質量情報を生成します。これにより、配列情報を決定することができます。私たちはこの配列情報を使用してペプチドの同一性を確認し、一次情報を提供します。

また、ペプチドがLCカラムから質量分析計のソースに進入する際にも、断片化情報が生成されます。研究の要件によっては、これは選択的なLC-MS/MSまたは非選択的であり、これは一種の連続質量分析（tandem MS）とみなすことができます。

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