すべてのカテゴリ
ENEN
ペプチドマッピング

ペプチドマッピング

ホーム >  微生物CDMO  >  分析とテスト  >  タンパク質の構造解析  >  ペプチドマッピング

微生物CDMO

ペプチドマッピング

液体クロマトグラフィー質量分析 (LC-MS) に基づくペプチド マッピング データは、アミノ酸配列の範囲、翻訳後修飾 (PTM、グリコシル化、酸化、脱アミド化など)、ジスルフィド結合など、天然および組み換えタンパク質の一次構造と高次構造に関する大量の情報を提供します。

Yaohai Bio-Pharma は、タンパク質構造の研究をスピードアップするために、LC-MS によるターゲットタンパク質のペプチド マッピング分析サービスを提供しています。

当社は、組み換えサブユニットワクチン、ナノボディ/VHH/シングルドメイン抗体（sdAbs）、抗体フラグメント、ホルモン/ペプチド、サイトカイン、成長因子（GF）、酵素、コラーゲンなど、さまざまな巨大分子のタンパク質構造特性評価に携わってきました。

ペプチドマッピングの規制要件

ICHQ6B ガイドラインでは、「適切な酵素または化学物質を使用して、製品を個別のペプチドに選択的に断片化し、得られたペプチド断片を HPLC またはその他の適切な分析手順で分析します。ペプチド断片は、アミノ酸組成分析、N 末端配列決定、質量分析 (MS) などの技術を使用して可能な限り特定する必要があります。適切に検証された方法を使用した有効成分または医薬品 (DP) のペプチド マッピングは、バッチ リリースの目的の製品構造を確認するためによく使用される方法です。」と推奨されています。

分析手順
分析 メソッド
ペプチドマッピング プロテアーゼ消化と液体クロマトグラフィー質量分析法（LC-MS） 
分析手順

1. 還元とアルキル化

目的は、ジスルフィド結合を還元し、生成された遊離チオールをブロックすることです。ジスルフィド結合の還元は、タンパク質構造を開き、タンパク質分解消化をより効率的にするのに役立ちます。このステップは、鎖を結合するジスルフィド結合を持つ多鎖タンパク質の場合（モノクローナル抗体、mAbs など）、鎖間の橋も切断します。

2. 酵素を使ったタンパク質の消化

目的は、タンパク質をペプチドに分解することです。タンパク質の理論的な配列と、酵素によるタンパク質の理論的な消化の知識に基づいて酵素を選択しました。このように酵素を選択すると、最高のペプチド マッピング分析が得られるはずです。

3. 消化ペプチドの分析 紫外線 (UV) とエレクトロスプレー質量分析検出 (LC/ES-MS) を備えたオンライン逆相高性能液体クロマトグラフィーを使用します。

LC（逆相LC）を用いた極性に基づくペプチド分離

ペプチドがLCカラムから溶出すると、質量分析計は質量情報とフラグメントイオン情報を生成します。これにより、配列情報を決定できます。配列情報を使用して、ペプチドの同一性を確認し、一次情報を提供します。

LC カラムから質量分析計ソースに入るペプチドから断片化情報を生成することもできます。研究の要件に応じて、これは選択的 LC-MS/MS または非選択的 LC-MS/MS のいずれかであり、タンデム MS の一形態として考えることができます。

無料見積もりを入手

連絡する