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N-グリコシル化部位の占有率

N-グリコシル化部位の占有率

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N-グリコシル化部位の占有率

N-グリコシル化部位占有率は糖タンパク質の生理学的特徴であり、主にN-グリカンを生成します。Yaohai Bio-PharmaのN-グリコシル化部位占有率分析サービスは、液体クロマトグラフィー-エレクトロスプレーイオン化質量分析-質量分析（LC-ESI-MS/MS）を使用した消化、放出、濃縮、分析を通じて行われます。

当社は、組み換えサブユニットワクチン、ナノボディ/VHH/シングルドメイン抗体（sdAbs）、抗体フラグメント、ホルモン/ペプチド、サイトカイン、成長因子（GF）、酵素、コラーゲンなど、さまざまな巨大分子のタンパク質構造特性評価に携わってきました。

N-グリコシル化部位占有に関する規制要件

ICH Q6B ガイドラインによれば、「糖タンパク質については、炭水化物含有量 (中性糖、アミノ糖、およびシアル酸) が測定されます。さらに、炭水化物鎖の構造、オリゴ糖パターン (アンテナプロファイル)、およびポリペプチド鎖のグリコシル化部位が可能な限り分析されます。」

分析方法
分析 メソッド
N-グリコシル化部位の占有率 脱グリコシラーゼおよびプロテアーゼ消化後のLC-MS
手順

1. タンパク質を消化して小さなペプチド断片を生成します。

2. エンドグリコシダーゼ H または PNGase F を使用した N 型グリカンの放出。エンドグリコシダーゼ H は、N 結合型グリカンのコアにある 1 つの GlcNAc 残基間の結合を切断します。一方、PNGase F は、GlcNAc と Asn 間の結合を切断して糖鎖全体を解放し、質量が XNUMX Da 増加して Asn を Asp に変換するグリコアミダーゼです。

3. HILIC（親水性相互作用液体クロマトグラフィー）によるN-糖ペプチドの濃縮

4. LC-ESI-MS/MSを用いたN結合型糖化部位の占有率の分析。

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