グルタミンおよびアスパラギンの側鎖の脱アミド化は、タンパク質バイオ医薬品の特性に与える影響に関して一般的な修飾です。脱アミド化はグルタミン残基でも起こりますが、通常その頻度は非常に低いです。脱アミド化の速度は温度、pH、局所的なタンパク質構造および隣接するアミノ酸残基によって影響されます。
Yaohai BioPharmaでは、液状クロマトグラフィー-質量分析法(LC-MS)を用いてアミノ酸の脱アミド化を検出するサービスを提供しています。
私たちは、再構成サブユニットワクチン、ナノボディ/VHHs/単一領域抗体(sdAbs)、抗体断片、ホルモン/ペプチド、サイトカイン、成長因子(CF)、酵素、コラーゲンなどを含む様々な大型分子のタンパク質構造解析に携わってきました。
ICH Q6Bガイドラインによれば、脱アミド化形態はクロマトグラフィー、電気泳動および/または他の関連する分析方法によって検出および特徴付けられることがあります。
分析 | 方法 |
脱アミド化 | 液体クロマトグラフィー-質量分析法 (LC-MS) |
例えば、アスパラギン酸の脱アミド化
1. 酵素分解
2. 高効率液状クロマトグラフィー (HPLC) 条件下でのLC-MS
3. データ解析
アスパラギン酸の脱アミド化はサクシニミド中間体(Suc)を介して起こり、これはレーシメーションおよび加水分解に敏感で、L-Asp、L-IsoAsp、D-Asp、およびD-IsoAspの4つのアスパラギン酸イソマーを生成します。
理論上、Glnの脱アミド化はAsnの脱アミド化と同様のプロセスを通じて4つの対応するグルタミン酸イソマーを生成する可能性があります。
高解像度の質量分析法は、アスニン/グリン含有ペプチドとその対応する脱アミド化されたアスパラギン酸/グルタミン酸のペプチド間の1ダルトンの質量差を容易に識別できます。