A rekombináns fehérjék gyakran látják az aminosav-oldalláncok, például a triptofán (Trp) és a metionin (Met) oxidációját, ami megváltoztatja a fehérjék fizikai-kémiai tulajdonságait. Ezek a változások hozzájárulhatnak az érintett fehérjék biológiai funkcióinak megváltozásához, például a kötődés elvesztéséhez, az enzimaktivitás csökkenéséhez, a váratlanul gyors kiürüléshez. A fehérjék az oxidatív reakciók fontos célpontjai, mivel gyorsan reagálnak az oxidálószerekkel, és bőségesen előfordulnak sejtekben, extracelluláris szövetekben és testnedvekben.
Ezért a fehérje-oxidáció monitorozása kritikus fontosságú a sikeres biofarmakon fejlesztéshez.
A Yaohai Bio-Pharma aminosav-oxidáció-elemző szolgáltatást kínál, amely lehetővé teszi az aminosav-oxidáció meghatározását folyadékkromatográfiás tömegspektrometriával (LC-MS).
Részt vettünk különböző nagy molekulák fehérjeszerkezeti jellemzésében, beleértve a rekombináns alegység vakcinákat, nanotesteket / VHH-kat / egydoménes antitesteket (sdAbs), antitest fragmentumokat, hormonokat / peptideket, citokineket, növekedési faktorokat (GF), enzimeket, stb.
Az aminosav-oxidációra vonatkozó szabályozási követelmények
Az ICH Q6B irányelvei szerint az oxidált formák kimutathatók és jellemezhetők kromatográfiás, elektroforetikus és/vagy egyéb releváns analitikai módszerekkel (pl. High Performance Liquid Chromatography (HPLC), kapilláris elektroforézis, tömegspektroszkópia, cirkuláris dikroizmus).
Analitikai módszerek
| Elemzés |
Mód |
| Aminosav oxidáció |
LC-MS, fordított fázisú nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (RP-HPLC) vagy hidrofób kölcsönhatásos kromatográfia, nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HIC-HPLC) és tömegspektrometria |
Analitikai eljárások
1. Mintaelőkészítés
2. LC-MS
3. Adatelemzés
A triptofán (Trp) maradékai különösen hajlamosak az oxidációra, mivel az aromás indol nagy reaktivitást mutat a reaktív oxigénfajokkal. A Trp oxidációja megköveteli a Trp-maradékok expozícióját, amelyek általában a fehérje háromdimenziós szerkezetében vannak eltemetve.
Amikor azonban a Trp-maradékok oxidálódnak, számos termékké alakulhatnak át, amelyek tulajdonságai nagyon eltérnek az eredeti Trp-től. A Trp oxidációjának leggyakoribb útja az N-formilkinurenin képződése (Tömegkülönbség: +32).
Egy másik gyakran oxidált aminosav a metionin. A Met-maradékban lévő kénatom egy vagy két oxigénatomot képes befogadni, ami szulfoxid (Tömegkülönbség: +16) vagy szulfon (Tömegkülönbség: +32) képződését eredményezi. Ez a módosítás viszonylag gyakori a Met jellemzően magas felületi expozíciója miatt.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
