A glutamin és az aszparagin oldalláncainak dezamidálása gyakori módosítás a fehérje biofarmakon tulajdonságaira gyakorolt hatás szempontjából. A dezamináció előfordulhat a glutaminmaradékokban, de általában sokkal kisebb arányban. A dezaminációs sebességet a hőmérséklet, a pH, a helyi fehérjeszerkezet és a szomszédos aminoacil-maradékok befolyásolják.
A Yaohai BioPharma aminosav-dezamidálási tesztelési szolgáltatást kínál, amely lehetővé teszi az aminosav-dezamidáció kimutatását folyadékkromatográfiás tömegspektrometriával (LC-MS).
Részt vettünk különböző nagy molekulák fehérjeszerkezeti jellemzésében, beleértve a rekombináns alegység vakcinákat, nanotesteket/VHH-kat/ egydoménes antitesteket (sdAb-okat), ellenanyag-fragmenseket, hormonokat/peptideket, citokineket, növekedési faktorokat (CF), enzimeket, stb.
Az aminosav-dezamidálásra vonatkozó szabályozási követelmények
Az ICH Q6B irányelvei szerint a dezaminált formák kromatográfiás, elektroforetikus és/vagy egyéb releváns analitikai módszerekkel kimutathatók és jellemezhetők.
Analitikai módszerek
| Elemzés |
Mód |
| Dezamidálás |
Folyadékkromatográfia-tömegspektrometria (LC-MS) |
Eljárások
pl. aszparaginsav dezamidálás
1. Enzimatikus emésztés
2. LC-MS nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) körülmények között
3. Adatelemzés
Az aszparagin dezamidálása egy szukcinimid intermedieren (Suc) keresztül megy végbe, amely érzékeny a racemizálódásra és hidrolízisre, így négy Asp izomer keletkezik, köztük L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp és D-IsoAsp.
Elméletileg a Gln dezamidálása négy megfelelő Glu-izomert generálhat az Asn dezamidáláshoz hasonló eljárással.
A nagy felbontású tömegspektrometria könnyen azonosítja az 1-Da tömegkülönbséget az Asn/Gln-tartalmú peptidek és a megfelelő dezaminált megfelelőik, az Asp/Glu között.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
