A Downstream Process (DSP) fejlesztésének jelentősége
A teljes fermentlé tartalmazza a célfehérjét vagy plazmidot, valamint a termékkel és folyamattal kapcsolatos szennyeződéseket, pl. aggregátumokat, mikrobiális sejtszubsztrátokat, gazdasejt fehérjéket (HCP), gazdasejt DNS-t (HCD), endotoxint és antibiotikumokat.
Ezért kulcsfontosságú egy hatékony DSP, tisztítási eljárás megtervezése bizonyos szennyeződések eltávolítására, valamint nagy tisztaságú és kiváló minőségű gyógyszerkészítmények előállítására. Ezenkívül a tisztítási folyamat optimalizálása hozzájárulhat a termék visszanyerésének növeléséhez, a költségek csökkentéséhez, valamint a folyamat skálázhatóságának és reprodukálhatóságának javításához.
Kulcsszavak: folyamatfejlesztés, optimalizálás és validálás, tisztítási folyamat, kromatográfia, szennyeződések eltávolítása, HCP eltávolítás, HCD elimináció, endotoxin eltávolítás, fehérje denaturáció és újratekeredés, VLP összeállítás, konjugáció
Alkalmazás: Biogyógyszeripar, humán gyógyászat, állatgyógyászat, vakcina, rekombináns nagy molekulájú biológiai szerek, rekombináns biológiai szerek, biológiai reagens
A Yaohai Bio-Pharma DSP megoldásai
Nagy tapasztalattal rendelkezünk a célfehérjék vagy plazmidok komplex mátrixokból történő izolálásában a downstream tisztítási folyamat fejlesztésével és optimalizálásával. A biológiai anyagok tisztítására különböző egységműveletek alkalmasak, beleértve a centrifugálást, szűrést, homogenizálást, lúgos lízist, ultraszűrést, kicsapást, fehérjedenaturálást és újratekercselést, kromatográfiát stb.
Elérhető tisztítási fejlesztési szolgáltatásaink a következők:
- A teljes tisztítási folyamat fejlesztése a sejt vagy a felülúszó gyűjtésétől a végső hatóanyagig.
- A tisztítási folyamat optimalizálása termék- és folyamatfüggő szennyeződések alapján a termék minőségének és biztonságának növelése érdekében, pl. HCP, HCD, endotoxin.
- Kulcsparaméterek meghatározása és optimalizálása egy vagy több egységműveletben, ideértve a sejtlízist, a tangenciális áramlási szűrést, a gyantaszűrőt, a kromatográfiát, a fehérjedenaturálást és az újratekergetést stb.
- A folyamat optimalizálása a minőség, a hozam, a visszanyerés, a költségek és a méretezhetőség szempontjából.
- A downstream tisztítási folyamat validálása.
- Kockázatalapú paraméter-tartomány értékelése és Kísérletek tervezése (DoE) a folyamatmodellezésben.
Szolgáltatás részletei
A standardizált fehérje- vagy plazmid-tisztító platformok több nyers tisztítási lépésen és 4-nél kevesebb kromatográfiás lépésen alapulnak, beleértve a befogást, a közbenső tisztítást és a polírozást.
| Szolgáltatás részletei |
Az egység műveletei |
paraméterek |
| Nyers tisztítás |
centrifugálás |
Forgási sebesség, idő |
| Nagynyomású homogenizálás |
Teljes szilárdanyag-tartalom, nyomás, ciklusok |
| Folyamatos lúgos lízis |
Az újraszuszpendált sejtek aránya a lízisoldathoz viszonyítva, a lízis ideje |
| Tangenciális áramlási szűrés |
A membrán anyaga és pórusmérete, a betáplálási sebesség transzmembránnyomás (TMP), a szűrőtérfogat és a membrán terület aránya |
| Csapadék |
A csapadék típusa és koncentrációja, adalékanyag, pH, hőmérséklet, idő |
| Denaturáció és újrahajtogatás |
A zárványtest fehérje szolubilizálása |
Denaturálószer-koncentráció (pl. karbamid, guanidin-HCl, erős ionos mosószer), mosószerek (pl. nátrium-dodecil-szulfát, SDS), redukálószerek (pl. ditiotreitol, DTT), kelátképző szerek (etilén-diamin-tetraecetsav, EDTA), hőmérséklet, idő |
| Fehérje újrahajtogatás |
Újrahajtogatási módszerek (hígítás, dialízis vagy SEC újrahajtogatás), fehérjekoncentrációk, pufferek, pH, hőmérséklet, idő, oxidáló és redukáló szerek (pl. glutation, GSH/oxidált glutation, GSSH, DTT/GSSH, cisztein/cisztin adalékok), kisméretű moleculedadalékok (L-arginin, karbamid, guanidin/HCl és mosószerek) |
| Rögzítés, közbenső tisztítás és polírozás |
AC (affinitáskromatográfia) |
Többféle kromatográfiás gyanta/oszlop (pl. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), oszlophossz és átmérő, puffer összetétel, injektálási térfogat, mozgófázis összetétel (adszorpció és deszorpció), pH, áramlási sebesség, kötés, Mosási és elúciós körülmények. |
| IEX (anion- vagy kationcserélő kromatográfia) |
| HIC (hidrofób interakciós kromatográfia) |
| Sótalanító és/vagy méretkizárásos kromatográfia (SEC) |
| RPC (fordított fázisú kromatográfia) |
| MMC, kevert módú kromatográfia |
Esettanulmány
Case 1
Megbízatást kaptunk a downstream tisztítási folyamat fejlesztésére és optimalizálására, hogy a fehérje tisztaságát 85%-ról 90%-ra növeljük, miközben csökkentjük a kromatográfiás lépések számát.
A Yaohai robusztus és méretezhető tisztítási eljárást biztosított 3 lépésből álló kromatográfiával a célfehérje, egy bakteriális allergia esetében. És a végső tisztaság elérte a 95%-ot.
Case 2
Ügyfelünk Yaohait jelölte ki a vírusszerű részecske (VLP) vakcina endotoxin eltávolítási folyamatának optimalizálására.
Munkacsoportunk kromatográfiás paraméterek optimalizálását végezte, és 98%-os tisztaságú, 12.8EU/mg endotoxin maradékanyagot tartalmazó gyógyszert állítottunk elő.
Tapasztalataink
- Részt vettünk különböző nagy molekulák fejlesztésében és gyártásában, beleértve a rekombináns alegység vakcinákat, VLP-ket, hormonokat (inzulin, GLP-1, növekedési hormon), citokinek (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21) ), növekedési faktorok (EGF, FGF, NGF), nanotestek/egydoménes antitestek (sdAb), enzimek stb.
Felszerelés
Az iparágban vezető AKTA Pure, AKTA Avant és Preparative HPLC rendszereket használunk különféle kromatográfiás eljárások végrehajtására, beleértve az affinitást, ioncserét, hidrofób kölcsönhatást, fordított fázisú és méretkizárásos kromatográfiát.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
