A rekonstruált fehérjék gyakran tapasztalják az amínsav oldals láncok oxidációját, mint például a triptofán (Trp) és a metionin (Met), ami megváltoztatja a fehérjék fizikai-kémiai tulajdonságait. Ezek a változások befolyásolhatják a biológiai függvényeket a befolyásolt fehérjéken, például csökkenő kötési képesség, enzimtevénység csökkentése, vagy váratlanul gyorsabb kivonulás. A fehérjék fontos célpontok az oxidatív reakciók számára, mivel gyorsan reagálnak az oxidánsokkal, és bőségesen találhatóak a sejtben, a szellőszövetekben és a testvízekben.
Ezért a fehérjé-oxidáció figyelése alapvető sikeres biofarmaceutikai fejlesztés szempontjából.
A Yaohai Bio-Pharma ajánlata tartalmazza az amínsav-oxidáció elemzését, amely lehetővé teszi az amínsav-oxidáció meghatározását folyadékromatográfiás-masszaspektrometriai (LC-MS) módszerrel.
Részt vettünk különböző nagy molekulák Fehérje Strukturális Jellemezésében, beleértve a Recombinant Subunit Oltásokat, Nanobody-ket / VHH-ket / Egydomos fehérjéket (sdAbs), Fehérje Törteket, Hormonokat/Peptidokat, Cytokinokat, Növekedési Faktorokat (GF), Enzimeket, Collageneket, stb.
Szabályozási követelmények az amino savak oxidációjára
Az ICH Q6B iránymutatások szerint az oxidált formákat kromatográfiás, elektroforétikus és/vagy más releváns analitikai módszerekkel lehet észlelni és jellemezni (pl., Magas Rendelű Folyadékcsatornás Kromatográfia (HPLC), kapilláris elektroforétika, tömegspektrometria, körös dichrozmus).
Elemző módszerek
| Elemzés |
Módszerek |
| Aminosav oxidáció |
LC-MS, Fordított Fázisú Magas Rendelű Folyadékcsatornás Kromatográfia (RP-HPLC) vagy Hidrofob Interakció Kromatográfia Magas Rendelű Folyadékcsatornás Kromatográfia (HIC-HPLC) és tömegspektrometria |
Analitikai eljárások
1. Minta előkészítése
2. LC-MS
3. Adatanalízis
A triptofán (Trp) maradékok különösen érzékenyek az oxidációra, mivel az aromatikus indol csoport magas reaktivitása a reaktív oxigénfajtaival. A Trp-oksidációhoz szükség van annak Trp maradékra, amely általában be van zárva a fehérjék háromdimenziós szerkezetében.
Azonban, amikor a Trp maradékok oxidálni kezdnek, különböző termékekbe alakulhatnak át, amelyek nagyon eltérő tulajdonságokkal rendelkeznek, mint az eredeti Trp. A leggyakoribb útja a Trp oxidációjának az N-formilkineurinín formálódása (Tömegkülönbség: +32).
Egy másik gyakran oxidált aminosav a metionin. A Met maradék sulfuratom elfogadhat egy vagy két oxigénatomot, ami sulfoxid (Tömegkülönbség: +16) vagy sulfon (Tömegkülönbség: +32) formációjához vezet, megfelelően. Ez a módosítás viszonylag gyakori a Met tipikusan magas felszíni elhelyezkedésé miatt.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
