Plasmiidne DNA, as vitro transkriptsiooni (IVT) matriit, on mRNA tootmise oluline tooraine. Peamine on plasmiidse DNA kõrge saagis, kõrge puhtusaste ja kõrge saagis eesmärk plasmiidprotsessi arengu ajal.
Yaohai Bio-Pharma pakub ühtset lahendust plasmiidide arendamiseks, sealhulgas ülesvoolu (fermenteerimine), allavoolu (puhastus) protsesside arendamiseks ja protsessi iseloomustamiseks ja protsessi valideerimiseks. Meil on laialdased kogemused plasmiidide saagise parandamisel ja selle eraldamisel keerukatest maatriksitest fermentatsiooni, puhastamise ja lisandite eemaldamise protsesside arendamise ja optimeerimise kaudu.
Plasmiidide valmistamise põhiline bioprotsess hõlmab: Escherichia coli (E. coli) fermentatsioon, rakkude kogumine ja aluseline lüüs, selgitamine, kontsentreerimine, kolmeastmeline kromatograafia (püüdmine, vahepealne puhastamine ja poleerimine) ja kontsentreerimine.
Teenuse üksikasjad | Üksuse toimingud | parameetrid |
E. coli Kääritamine |
Loksutage kolbi | Söötme koostised, antibiootikum, inokulaadi maht, kasvutemperatuur jne. |
Fermentaator (7 l) |
Antibiootikum, inokulaadi maht, kasvutemperatuur, pH, lahustunud hapnik (DO), söötmisrežiim (nt söötmisrežiim), söötmekeskkond, fermentatsiooniaeg jne. |
|
Rakkude saak | Mikrofiltratsioon | Standard E. coli koristusprotsess |
Rakkude lüüs | Rakkude resuspendeerimine, aluseline lüüs, neutraliseerimine | Leelise suhe, lüüsiaeg |
Selgitamine | Filtreerimine | Toorfiltratsioon, 20 µm ja 5 µm filtrirong (eelistatud) |
Kontsentratsioon | Ultrafiltreerimine, tangentsiaalne voolufiltreerimine | Poori suurus (või NMWC), transmembraanne rõhk (TMP), vool, filtraadi mahu ja membraani pindala suhe |
Kolmeastmeline kromatograafia | Suuruskromatograafia (SEC) või geelfiltratsioonkromatograafia (GFC) | Kolonni pikkus ja läbimõõt, puhvri koostis, süstimise maht, liikuva faasi koostis (adsorptsioon ja desorptsioon), pH, voolukiirus, tasakaalustamine, sidumine, pesemine ja elueerimise tingimused. |
Afiinsuskromatograafia (AF) | ||
Anioonivahetuskromatograafia (AEX) | ||
Kontsentratsioon | Ultrafiltreerimine, tangentsiaalne voolufiltreerimine | Poori suurus (või NMWC), transmembraanne rõhk (TMP), vool, filtraadi mahu ja membraani pindala suhe |
Rohkem bioloogilisi puhastusprotsessi lahendusi |