Дані пептидного картування на основі рідинної хроматографії та мас-спектрометрії (LC-MS) нададуть велику кількість інформації про структуру первинного та вищого порядку нативних і рекомбінантних білків, включаючи покриття амінокислотної послідовності, посттрансляційні модифікації (PTM, наприклад, глікозилювання , окислення, дезамідування), дисульфідні зв'язки та ін.
Yaohai Bio-Pharma пропонує послуги аналізу пептидного відображення цільового білка за допомогою РХ-МС, щоб прискорити дослідження структури білка.
Ми брали участь у структурній характеристиці білків різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субодиничні вакцини, нанотіла/VHH/однодоменні антитіла (sdAbs), фрагменти антитіл, гормони/пептиди, цитокіни, фактори росту (GF), ферменти, колагени, тощо
Нормативні вимоги до картування пептидів
Настанова ICHQ6B рекомендує: «Вибіркова фрагментація продукту на окремі пептиди виконується з використанням відповідних ферментів або хімічних речовин, а отримані пептидні фрагменти аналізуються за допомогою ВЕРХ або іншої відповідної аналітичної процедури. Пептидні фрагменти слід ідентифікувати, наскільки це можливо, за допомогою таких методів, як аналіз амінокислотного складу, N-кінцеве секвенування або мас-спектрометрія (МС). Пептидне картування діючої речовини або лікарського засобу (DP) за допомогою відповідного валідованого методу є методом, який часто використовують для підтвердження бажаної структури продукту для випуску серії».
Аналітичні методи
| Аналіз |
Методи |
| Картування пептидів |
Розщеплення протеазами та рідинна хроматографія-мас-спектрометрія (LC-MS) |
Аналітична процедура
1. Відновлення та алкілування
Метою є зменшення дисульфідних містків і блокування утвореного вільного тіолу. Відновлення дисульфідних містків сприяє відкриттю білкової структури, що робить протеолітичне травлення ефективнішим. Цей крок також розірве містки між ланцюгами у випадку багатоланцюгових білків, які мають дисульфідні містки, що з’єднують ланцюги (наприклад, моноклональні антитіла, моноклональні антитіла).
2. Розщеплення білка за допомогою ферментів
Мета полягає в тому, щоб розщепити білок на пептиди. Ми вибрали ферменти на основі теоретичної послідовності білка та знання теоретичного перетравлення білка ферментами. Вибір ферментів у такий спосіб має призвести до найкращого аналізу картування пептидів.
3. Аналіз розщеплених пептидів Використання он-лайн обернено-фазової високоефективної рідинної хроматографії з ультрафіолетовим (УФ) та електророзпилювальним мас-спектрометричним виявленням (LC/ES-MS).
Розділення пептидів на основі полярності за допомогою LC (LC з оберненою фазою)
У міру елюювання пептиду з колонки РХ мас-спектрометр генеруватиме інформацію про масу разом із інформацією про фрагменти іонів, що дозволяє нам визначити інформацію про послідовність. Ми використовуємо інформацію про послідовність, щоб підтвердити ідентичність пептиду та надати первинну інформацію.
Ми також можемо генерувати інформацію про фрагментацію з пептидів, коли вони надходять у джерело мас-спектрометра з колонки LC. Залежно від вимог дослідження, це або селективна РХ-МС/МС, або неселективна, яку можна розглядати як форму тандемної МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
