Зайнятість сайту N-глікозилювання є фізіологічною особливістю глікопротеїнів і в основному продукує N-глікан. Послуги Yaohai Bio-Pharma з аналізу зайнятості сайтів N-глікозилювання проводяться шляхом перетравлення, вивільнення, збагачення та аналізу за допомогою рідинної хроматографії-електророзпилювальної іонізаційної мас-спектрометрії-мас-спектрометрії (LC-ESI-MS/MS).
Ми брали участь у структурній характеристиці білків різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субодиничні вакцини, нанотіла/VHH/однодоменні антитіла (sdAbs), фрагменти антитіл, гормони/пептиди, цитокіни, фактори росту (GF), ферменти, колагени, тощо
Нормативні вимоги до розміщення сайту N-глікозилювання
Згідно з рекомендаціями ICH Q6B, «для глікопротеїнів визначається вміст вуглеводів (нейтральні цукру, аміноцукри та сіалові кислоти). Крім того, структура вуглеводних ланцюгів, олігосахаридний малюнок (профіль антени) і сайт(и) глікозилювання поліпептидного ланцюга аналізуються якнайкраще».
Аналітичний метод
| Аналіз |
Методи |
| Зайнятість сайту N-глікозилювання |
РХ-МС після розщеплення деглікозилазою та протеазою |
Процедури
1. Перетравлення білків для отримання малих пептидних фрагментів.
2. Вивільнення N-глікану за допомогою ендоглікозидази H або PNGase F. Ендоглікозидаза H розриває зв’язок між двома залишками GlcNAc у ядрі N-зв’язаних гліканів, тоді як PNGase F є глікоамідазою, яка розриває зв’язок між GlcNAc і Asn, звільняючи весь цукрового ланцюга та перетворення Asn в Asp із збільшенням маси на 1-Da.
3. Збагачення N-глікопептидом за допомогою HILIC (рідинна хроматографія гідрофільної взаємодії)
4. Аналіз зайнятості сайту N-зв'язаного глікозилювання за допомогою LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
