Профілювання N-гліканів має важливе значення для виробництва біофармацевтичних препаратів. Yaohai Bio-Pharma надає послуги профілювання N-гліканів за допомогою рідинної хроматографії-мас-спектрометрії (LC-MS) вивільнених і мічених гліканів. Загальні етапи приготування зразка N-гліканів включають розщеплення глікопротеїну (GP), деглікозилювання, очищення, маркування/дериватизацію та твердофазну екстракцію (SPE).
Ми брали участь у структурній характеристиці білків різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субодиничні вакцини, нанотіла/VHH/однодоменні антитіла (sdAbs), фрагменти антитіл, гормони/пептиди, цитокіни, фактори росту (GF), ферменти, колагени, тощо
Нормативні вимоги до профілювання N-гліканів
Згідно з рекомендаціями ICH Q6B, «для глікопротеїнів визначається вміст вуглеводів (нейтральні цукру, аміноцукри та сіалові кислоти). Крім того, наскільки це можливо, аналізується структура вуглеводних ланцюгів, олігосахаридний малюнок (антенний профіль) і сайт(и) глікозилювання поліпептидного ланцюга.
Аналітичний метод
| Аналіз |
Методи |
| Профілювання N-глікану |
Рідинна хромато-мас-спектрометрія (РХ-МС) аналіз вивільнених і мічених гліканів |
Процедури
1. Ферментативне вивільнення глікану за допомогою пептидної N-глікозидази F (PNGase F)
2. Дериватизація вивільнених гліканів 2-амінобензамідом (2-AB)
3. Очищення зібраних N-гліканів на колонці TSK Amide - 80, якщо присутні великі кількості детергентів, нелетких солей або матеріалів з вільними аміногрупами.
4. Мічення флуоресцентним 2-амінобензамідом (2-АВ)
5. РХ-МС аналіз мічених N-гліканів
6. Аналіз даних
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
