У рекомбінантних білках часто відбувається окислення відкритих бічних ланцюгів амінокислот, таких як триптофан (Trp) і метіонін (Met), змінюючи фізико-хімічні властивості білків. Ці зміни, у свою чергу, можуть сприяти зміні біологічних функцій уражених білків, таких як втрата зв’язування, зниження ферментативної активності, неочікувано швидкий кліренс. Білки є важливими мішенями для окислювальних реакцій, оскільки вони швидко реагують з окислювачами і містяться у великій кількості в клітинах, позаклітинних тканинах і рідинах організму.
Таким чином, моніторинг окислення білків має вирішальне значення для успішної біофармацевтичної розробки.
Yaohai Bio-Pharma пропонує послуги аналізу окислення амінокислот, які дозволяють визначити окислення амінокислот за допомогою рідинної хроматографії-мас-спектрометрії (LC-MS).
Ми брали участь у структурній характеристиці білків різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субодиничні вакцини, нанотіла/VHH/однодоменні антитіла (sdAbs), фрагменти антитіл, гормони/пептиди, цитокіни, фактори росту (GF), ферменти, колагени, тощо
Нормативні вимоги до окислення амінокислот
Згідно з рекомендаціями ICH Q6B, окислені форми можна виявити та охарактеризувати за допомогою хроматографічних, електрофоретичних та/або інших відповідних аналітичних методів (наприклад, високоефективної рідинної хроматографії (HPLC), капілярного електрофорезу, мас-спектроскопії, кругового дихроїзму).
Аналітичні методи
| аналіз |
Методи |
| Окислення амінокислот |
LC-MS, обернено-фазова високоефективна рідинна хроматографія (RP-HPLC) або хроматографія гідрофобної взаємодії, високоефективна рідинна хроматографія (HIC-HPLC) і мас-спектрометрія |
Аналітичні процедури
1. Пробопідготовка
2. РХ-МС
3. Аналіз даних
Залишки триптофану (Trp) особливо схильні до окислення через високу реакційну здатність ароматичного індолу з активними формами кисню. Окислення Trp вимагає деякого впливу залишків Trp, які зазвичай поховані в тривимірній структурі білка.
Однак, коли залишки Trp окислюються, вони можуть перетворюватися на різноманітні продукти з властивостями, що дуже відрізняються від вихідного Trp. Найпоширеніший шлях окислення Trp включає утворення N-формілкінуреніну (різниця мас: +32).
Інша часто окислена амінокислота - метіонін. Атом сірки в залишку Met може приймати один або два атоми кисню, що призводить до утворення сульфоксиду (різниця мас: +16) або сульфону (різниця мас: +32), відповідно. Ця модифікація відносно поширена через типово високу експозицію поверхні Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
