Значення Розробки Верхнього Процесу
Верхній процес (USP), також відомий як процес ферментування, є одним із початкових етапів верхнього біотехнологічного процесу. Мікробіальний процес ферментування є ключовим для високогустотної культури клітин та експресії зовнішнього гена, що безпосередньо впливає на виробництво біопродуктів та його вартість.
На ранніх етапах розробки біопродуктів (доклінічний або фаза 1/2) головне увага приділяється розробці масштабованого процесу без використання продуктів тваринного походження з середньою видачею та відповідністю всім стандартам якості продукту.
Під час пізньої стадії (фаза 3 або комерційна), ми будемо зосереджуватися на видачі, robustness, масштабованості та відтворюваності, створюючи витратне процес. Активності, які розв'язують ці проблеми, є характеристика процесу та валідація процесу. Тим часом, інструменти якісті за проектом (QbD) та планування експериментів (DoE) зазвичай застосовуються.
Ключові слова: розробка, оптимізація та валідація процесу, процес ферментації, ферментація мікробних клітин, бактеріальна ферментація, дріжджова ферментація, високоенергетична ферментація, інженерна штамова ферментація
Застосування: біофармацевтична промисловість, ліки для людей, ліки для тварин, вакцини, рекомбінантні великі молекулярні біологічні препарати, рекомбінантні біологічні засоби, біологічний реактив
Рішення USP Yaohai Bio-Pharma
Дяки більше ніж 10 рокам досвіду у мікробній ферментації, Yaohai Bio-Pharma має знання для допомоги у розв'язанні викликів процесу ферментації. Ми можемо швидко встановити стратегії високоенергетичної ферментації для Escherichia coli (E. coli) секреція у періплазматичну ділянку, солюбільна інтраселюлярна експресія або експресія у формі інклужонних тіл, а також екстра- та інтраселюлярна експресія у дріжджах.
Наші доступні загальні послуги розробки ферментації включають:
- Проектування процесу ферментації, що виконується у малому масштабі 7 л у режимі додавання харчів
- Перевірка трих батч-процесів у ферментерах об'ємом 7 л
- Проміжне масштабування процесу до 30л/70л
Ми гнучко можемо проводити багатопараметрову оптимізацію для досягнення бажаного виходу чи пропорції, використовуючи метод One-Time-A-Factor (OTAF) або Design-of-experiments (DoE).
Ключові параметри ферментації наведені нижче:
Склад харчових середовищ для ферментації без використання продукції тваринного походження
Без антибіотиків або з їх використанням, об'єм початкової культури
Температура росту, pH, Рівень дисолюованого кисню (DO)
Режим годування (наприклад, fed-batch)
Концентрація індуктора (наприклад, IPTG, метанол), Точка індукції (мокра маса клітин/OD600),
Температура індукції, Час індукції
тощо
Деталі послуги
| Послуги |
Процес потоку |
| Виховання в колбу з трясучкою (500 мл) |
Підготовка медій без тваринних компонентів → Виховання початкової культури → Виховання у трясучці → Індукція → Збір |
| Виховання в ферментаторі (7 л) |
Підготовка медій без тваринних компонентів → Виховання початкової культури → Висока щільність ферментного виховання у біореакторі об'ємом 7 л → Індукція → Збір |
| Контроль якості білків/пептидів |
Попередня обробка Виразка розчинних інтерклілярних білків: Збір та перерозчинення мікробних клітин → Ультразвукова дроблення → Видалення частинок клітин → Суцільний екстракт Виразка інклูзійних тіл: Збір та перерозчинення мікробних клітин → Ультразвукова дроблення → Підготовка інклюзійних тіл → Суцільний екстракт Екстраклілярна виразка розчинних білків: Збір супернатанту культури → Концентрація та обмін буфера → Суцільний екстракт Аналіз якості Суцільний екстракт як зразок → Аналіз цільового білка за допомогою SDS PAGE або запобіжного блотингу (WB) |
| Контроль якості плазмід |
Попередня обробка та аналіз якості Екстракція плазмід → Аналіз ДНК за допомогою агарового гелевого електрофорезу |
Вивчення випадку
Нами було замовлено від клієнта збільшення видачі цільового поліпептидного гормону від 8 г/л до 10 г/л.
На основі Повного факторного дизайну та Дизайну поверхні відповіді у інструментах DoE ми швидко виявили та оптимізували ключові параметри ферменту. У випадку оптимізованого процесу ферменту з високою щільністю клітин, рівень експресії збільшився до 10 г/л.
Наші досвідченість
- Ми працювали з різними типами мікробних хостів, наприклад, E.Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) і Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Ми маємо досвід роботи з E. coli секреція періплазматична, солюбільна та експресія включувальних тіл, а також дрожжова інтрacellular або екстрацеллюлярна експресія. Видача включувальних тіл досягає 10г/Л, тоді як видача солюбільного белка знаходиться в діапазоні від 0.5 до 15г/Л.
- Ми брали участь у розробці та виробництві різноманітних великих молекул, включаючи рекомбінантні субунітні вакцини, вірусоподібні частинки (VLP), гормони (інсулін, GLP-1, гормон зросту), цитокіни (Інтерлейкін-2/IL-2, IL-15, IL-21), фактори зросту (EGF, FGF, NGF), нанотіла/однодоменні антитіла (sdAbs), ензими тощо.
- Обладнання
7Л*16 Ферментаційна система
Аналізатор Cedex Bio, Біопроцесний аналізатор
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
