Значення розробки нижньострумового процесу (DSP)
Усі ферментаційні брокати містять цільовий білок або плазмід, а також продукт-та процес-пов'язані забруднення, наприклад, агрегати, мікробіальні клітинні субстрати, Білки Хозяїна Клітин (HCP), ДНК Хозяїна Клітин (HCD), ендотоксини та антибіотики.
Тому є ключовим завданням створити ефективний DSP, процес очищення, щоб вилучити певні забруднення та виробляти високочистий і якісний ліковий речовину. Крім того, оптимізація процесу очищення може допомогти збільшити відновлення продукту, зменшити витрати, покращити масштабованість та повторюваність процесу.
Ключові слова: розробка процесу, оптимізація та валідація, процес очищення, хроматографія, вилучення забруднень, вилучення HCP, елімінація HCD, вилучення ендотоксинів, денатурація та рефолдування білків, асемблія VLP, кон'югація
Застосування: біофармацевтична промисловість, ліки для людей, ліки для тварин, вакцини, рекомбінантні великі молекулярні біологічні препарати, рекомбінантні біологічні засоби, біологічний реактив
Розв'язки DSP від Yaohai Bio-Pharma
Ми маємо великий досвід ізольовування цільових білків або плазмідів з складних матриць шляхом розробки та оптимізації процесу очищення. Існують різні види одиничних операцій, які підходять для очищення біологічних препаратів, включаючи центрування, фільтрацію, гомогенізацію, алкалінну лізис, ультрафільтрацію, опадання, денатурацію та рефолдування білків, хроматографію тощо.
Наші доступні послуги розробки очищення включають:
- Розробку всього процесу очищення від збору клітин або супернатанту до остаточного активного інгредієнта.
- Оптимізація процесу очищення на основі продукт- та процес-зв'язаних забруднень для підвищення якості та безпеки продукту, наприклад, БДП, БКД, ендотоксин.
- Визначення та оптимізація ключових параметрів в одній або кількох одиницях операцій, включаючи лізис клітин, дотичне поточне фільтрування, екранування смоли, хроматографію, денатурацію білка та рефолдовування тощо.
- Оптимізація процесу з урахуванням якості, видачі, відновлення, вартості та масштабованості.
- Перевірка чисткового процесу нижче по течії.
- Оцінка діапазону параметрів на основі ризиків та планування експериментів (DoE) в моделюванні процесу.
Деталі послуги
Стандартизована платформа очищення білків або плазмідів базується на декількох грубих етапах очищення та менше ніж 4 етапах хроматографії, включаючи захоплення, проміжне очищення та довідку.
| Деталі послуги |
Одиниці операцій |
Параметри |
| Грубе очищення |
Центрування |
Швидкість обертання, час |
| Гомогенізація високим тиском |
Загальна маса твердих речовин, Тиск, Цикли |
| Неперервне алкальне лізис |
Відношення повторно розчинених клітин до розчину лізису, Час лізису |
| Тангенційна поточкова фільтрація |
Матеріал мембрани та розмір пор, Швидкість питомого потоку, Тиск через мембрану (TMP), Відношення об'єму фільтрату до площі мембран |
| Випадання у осад |
Тип і концентрація випадувача, Додаток, pH, Температура, Час |
| Денатурація та рефолдовування |
Солюбілізація білок включних тіл |
Концентрація денатуранту (наприклад, уреа, гуанідин HCl, сильний іонний detergent), Детергенти (наприклад, натрієвий додекилсулфат, SDS), Знижувальні агенти (наприклад, дитйотретол, DTT), Хелатувальні агенти (етиленедіамінететраасевна кислота, EDTA), Температура, Час |
| Розгортання білка |
Методи розгортання (розбавлення, діаліз або SEC розгортання), Концентрації білків, Буфери, pH, Температура, Час, Оксидуючі та знижувальні агенти (наприклад, глутатіон, GSH/Оксидований глутатіон, GSSH, DTT/GSSH, Цистейн/Цистин), Малих молекул додатки (L-аргінін, уреа, гуанідин/HCl, і детергенти) |
| Захоплення, проміжне очищення та полірування |
АХ (Афінітна хроматографія) |
Низка типів хроматографічного наповнювача/колонки (наприклад, АХ, ІЕХ, ГІС, СЕХ, РРХ, ММС), Довжина та діаметр колонки, Склад буфера, Об'єм введення, Склад подвижної фази (адсорбція та дезорбція), pH, Швидкість потоку, Умови зв'язування, промивання та елювання. |
| ІЕХ (Хроматографія іонного обміну аніонного чи катіонного типу) |
| ГІС (Гідрофобна інтеракційна хроматографія) |
| Десалтація та/або хроматографія виключення за розмірами (SEC) |
| ХРФ (Хроматографія зворотнього фазового) |
| ММХ, Хроматографія змішаного режиму |
Вивчення випадку
ПРИКАЗ 1
Нам поручено розробити та оптимізувати процес очищення на етапі післяпроцесу, щоб підвищити чистоту білка з 85% до 90%, одночасно зменшуючи кроки хроматографії.
Яохай представив стійкий та масштабовий процес очищення у три етапи хроматографії для цільового білка, бактеріальної алергії. Кінцева чистота досягла 95%.
ПРИКАЗ 2
Яохай було призначено клієнтом для оптимізації процесу вилучення ендотоксинів вірусоподібної частинки (VLP) вакцини.
Наша команда провела оптимізацію параметрів хроматографії та підготувала лікарську речовину з чистотою 98% та залишком ендотоксинів 12.8EU/мг.
Наші досвідченість
- Ми брали участь у розробці та виробництві різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субунітні вакцини, ВЛП, гормони (інсулін, GLP-1, гормон зросту), цитокіни (Інтерлейкін-2/IL-2, IL-15, IL-21), фактори зростання (EGF, FGF, NGF), нанотіла/однодоменні антитіла (sdAbs), ензими тощо.
Обладнання
Ми використовуємо відраслеві лідери AKTA Pure, AKTA Avant та Препаративні системи HPLC для виконання різних хроматографічних методів, включаючи афінну, іонний обмін, гідрофобне взаємодіяння, зворотню фазу та хроматографію розмірного виключення.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
