Рекомбінантні протеїни часто піддаються окисленню викритих бокових ланцюгів амінокислот, таких як триптофан (Trp) і метіонін (Met), що змінює фізико-хімічні властивості протеїнів. Ці зміни, у свою чергу, можуть призвести до зміни біологічних функцій впливених протеїнів, таких як втрата зв'язування, зменшення ензимної активності, неочікувано швидке видалення. Протеїни є важливими цілями для окислювальних реакцій, оскільки вони швидко реагують з окислювачами і є обилними в клітинах, міжклітинних тканях і тілесних рідинах.
Тому, контролювання окислення протеїнів є критичним для успішного розроблення біофармацевтичних продуктів.
Yaohai Bio-Pharma пропонує послугу аналізу окислення амінокислот, яка дозволяє вам визначати окислення амінокислот за допомогою Жиднопhaфової Хроматографії-Масспектрометрії (LC-MS).
Ми брали участь у визначенні структури білків різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субунітні вакцини, нанотіла/ VHHs/ однодоменні антитіла (sdAbs), фрагменти антитіл, гормони/пептиди, цитокіни, фактори росту (GF), ензими, колагени тощо.
Регуляторні вимоги до окислення амінокислот
За угодою ICH Q6B, окислені форми можуть бути виявлені та визначені за допомогою хроматографічних, електрофоретичних та/або інших відповідних аналітичних методів (наприклад, високопродуктивна розчинна хроматографія (HPLC), капілярна електрофорез, мас-спектрометрія, циркулярна дихроїсність).
Аналітичні методи
| Аналіз |
Методи |
| Оксидування амінокислот |
LC-MS, хроматографія високої продуктивності з оберненою фазою (RP-HPLC) або хроматографія взаємодії з гідрофобними доменами високої продуктивності (HIC-HPLC) та мас-спектрометрія |
Аналітичні процедури
1. Підготовка вибірки
2. LC-MS
3. Аналіз даних
Резидути триптофану (Trp) особливо піддаються окисленню через високу реактивність ароматичного індольового кільця з реактивними формами кисню. Окислення Trp вимагає деякої експозиції резидутів Trp, які зазвичай знаходяться у скритому стані у тривимірній структурі білок.
Проте, коли резидути Trp окислюються, вони можуть перетворюватися на різноманітні продукти, що мають дуже відмінні властивості від початкового Trp. Найбільш поширений шлях окислення Trp включає утворення N-формилкінуреніну (Різниця маси: +32).
Іншим часто окисленим амінокислотним залишком є метіонін. Сульфурний атом у залишку Met може приймати або один, або два атоми кисню, що призводить до утворення сульфоксиду (Різниця маси: +16) або сульфону (Різниця маси: +32), відповідно. Ця модифікація досить пошиrena через типово велику поверхневу експозицію Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
