การผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์: สายพันธุ์ E. coli ที่ออกแบบทางวิศวกรรม

เชื้ออีโคไล (E. coli) มีบทบาทสำคัญในการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ในอุตสาหกรรมชีวเภสัชกรรม โดยทำหน้าที่เป็นพาหะการแสดงออกตัวแรกสำหรับการผลิตยาชีวภาพ อีโคไลมีการเจริญเติบโตอย่างรวดเร็ว การปรับแต่งทางพันธุกรรมที่สะดวก และการสังเคราะห์โปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่รวดเร็ว นอกจากนี้ยังมีข้อดีอื่นๆ อีกมากมาย การดัดแปลงอย่างกว้างขวางทำให้อีโคไลเป็นตัวเลือกที่ดีที่สุดในการแสดงออกของโปรตีน ซึ่งนำไปสู่การออกแบบสายพันธุ์ต่างๆ ของอีโคไลที่ผ่านการดัดแปลง

Yaohai Bio-Pharma มีความเชี่ยวชาญในการให้บริการเอาท์ซอร์สแบบครบวงจรสำหรับการหมัก การทำให้บริสุทธิ์ การพัฒนาขั้นตอนการสร้างสูตร และการผลิตผลิตภัณฑ์ชีวเภสัชภัณฑ์ต่างๆ โดยใช้ระบบการแสดงออกของ E. coli จากประสบการณ์อันยาวนานของ Yaohai เราสรุปได้ว่ามีการใช้สายพันธุ์ E. coli ทั่วไปสี่สายพันธุ์ในการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์และคุณลักษณะของสายพันธุ์เหล่านี้

สายพันธุ์ BL21

สายพันธุ์ BL21 ซึ่งมาจากสายพันธุ์ E. coli B ขาดโปรตีเอส Lon และโปรตีเอส OmpT ของเยื่อหุ้มเซลล์ภายนอก โปรตีเอส Lon ย่อยโปรตีนภายนอกเป็นหลัก ในขณะที่ OmpT ย่อยโปรตีนของเมทริกซ์นอกเซลล์เป็นหลัก การไม่มีโปรตีเอสหลักทั้งสองนี้สามารถป้องกันการย่อยโปรตีนรีคอมบิแนนท์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ

สายพันธุ์โอริกามิ

สายพันธุ์โอริกามิ ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของอีโคไล K-12 มีการกลายพันธุ์ในไทโอรีดอกซินรีดักเตสและกลูตาไธโอนรีดักเตส ซึ่งช่วยให้เกิดการสร้างโปรตีนที่พับอย่างถูกต้องซึ่งประกอบด้วยพันธะไดซัลไฟด์ และเพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีน สายพันธุ์โอริกามิ ได้แก่ โอริกามิ โอริกามิ 2 และโอริกามิ B เหมาะสำหรับการแสดงออกของโปรตีนที่มีพันธะไดซัลไฟด์

ความเครียดสับเปลี่ยน

สายพันธุ์ SHuffle แสดงออกถึงไอโซเมอเรสพันธะไดซัลไฟด์ DsbC ในไซโตพลาซึมอย่างต่อเนื่อง ส่งเสริมการสร้างพันธะไดซัลไฟด์ที่ถูกต้องในโปรตีนที่ถูกออกซิไดซ์ นอกจากนี้ยังทำหน้าที่เป็นแชเปอโรนระดับโมเลกุลสำหรับการพับโปรตีน ช่วยในการสร้างโครงร่างที่ถูกต้อง

สายพันธุ์โรเซตต้า

สายพันธุ์ Rosetta เสริม E. coli ด้วย tRNA ที่สอดคล้องกับโคดอนหายาก โดยมุ่งหวังที่จะปรับปรุงระดับการแสดงออกของยีนภายนอก โดยเฉพาะยีนยูคาริโอตในระบบโพรคาริโอต สายพันธุ์นี้ได้รับมาจาก BL21 และมีพลาสมิด pRARE ที่ทนต่อคลอแรมเฟนิคอล โดยเสริมด้วย tRNA จำนวน XNUMX ตัวที่สอดคล้องกับโคดอนหายาก (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC และ GGA) ซึ่งเดิมไม่มีอยู่ใน E. coli ทำให้มีการแสดงออกของโปรตีนที่ "สากล" มากขึ้น

สรุป

ปัจจัยหลักสามประการสำหรับการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่ประสบความสำเร็จ ได้แก่ โฮสต์ เวกเตอร์ และสภาวะการเพาะเลี้ยง โดยอิงจากความเข้าใจคุณสมบัติทางฟิสิกเคมีของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ ข้อได้เปรียบเฉพาะตัวของแต่ละสายพันธุ์ และความต้องการเฉพาะของการทดลอง ควรเลือกโฮสต์ที่เหมาะสมที่สุด นอกจากนี้ ควรปรับปัจจัยต่างๆ เช่น เวกเตอร์พลาสมิด อุณหภูมิ และตัวเหนี่ยวนำให้เหมาะสม เพื่อเพิ่มการแสดงออกของโปรตีน

นอกจากนี้ Yaohai Bio-Pharma ยังแสวงหาพันธมิตรระดับสถาบันหรือระดับบุคคลทั่วโลกอย่างแข็งขัน และเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใดๆ โปรดติดต่อเราได้ที่: [email protected]