mRNA синтезируется методом транскрипции in vitro (IVT) из линеаризованной плазмидной ДНК (pDNA). Во время процедуры IVT также образуются некоторые побочные продукты, включая двойную нить РНК (dsRNA), которая идентифицируется как основной триггер для врожденного иммунного пути. Критически важно удалить примеси и получить высокие выходы чистой mRNA для исследований in vitro/in vivo мРНК и терапевтических применений.
Yaohai Bio-Pharma разработала набор технологий синтеза мРНК для предоставления высокочистой мРНК , таких как проектирование и оптимизация последовательности, ИВТ, очистка, лиофилизация и инкапсуляция в липидные наночастицы (ЛНЧ). Все продукты выпускаются под строгим контролем качества. Афинитная хроматография (АХ), основанная на сильном и избирательном взаимодействии между 3′ полимерным хвостом мРНК и олиго dT фазы, является эффективной и масштабируемой стратегией очистки мРНК.
Результаты работы
| Продукт |
Индивидуальная Высокочистая мРНК
|
| Длина |
100~10,000 нуклеотидов |
| Содержание РНК |
100 мкг~10 мг (OD260) |
| Чистота |
A260/A280 |
| Идентификация и чистота |
Агарозный Гель Электрофорез (AGE)
Капиллярный Электрофорез (CE)
|
| Буфер |
Вода для РНК (жидкость) |
| Доставка |
Доставлять с сухим льдом; или при комнатной температуре |
| Хранение |
● Жидкость, при или ниже -20°C
● Лиофилизированный порошок, при 4°C
|
| Применение |
Разработка формуляции ЛНП,
Клеточные ассайи, Эксперимент на животных
|
Другие настраиваемые опции
| крышка 5' |
● Без капа
● Cap0, ко-капированный
● Cap1, ко-капированный
● Cap1, ферментативное капирование
|
| 5' UTR/3' UTR |
● Природная последовательность UTR
● Мутантная/Инженерная последовательность UTR
|
| 3' Полиаденилатный хвост |
● хвост из 100A ~120A (рекомендуется)
● Сегментированный полиA хвост
● Другой пользовательский хвост
|
| Модифицированные нуклеозиды |
● Немодифицированные основания,
● Псевдouriдин (Ψ),
● N1-Метилпсевдouriдин (N1Ψ),
● 5-Метилцитозин (m5C),
● 5-Метилурадин (m5U),
● 5-Метоксиурадин (5moU),
● 2-тиоуридин (s2U),
● 2′-O-метил-U
● Другие
|
Изучение кейса
Мы разработали многоступенчатый процесс хроматографической очистки и получили mRNA с высокой чистотой и целостностью (>95%).
Рис. Анализ mRNA с высокой чистотой (＞98%)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
