5'-gala vāciņš ir būtiska mRNS modifikācija. mRNS ar vāciņu struktūrām, īpaši Cap1 struktūrām, atvieglo mRNS izvairīšanos no iedzimtām imūnreakcijām in vivo, kā rezultātā notiek efektīva proteīna translācija.
Fermentatīvā ierobežošana (divpakāpju metode) ir parastā mRNS ierobežošanas metode, kas ir līdzīga ierobežošanas procesam eikariotu organismos. Vairāku enzīmu iedarbībā 7-metilguanīns (m7G) tiek saistīts ar mRNS 5'-galu caur 5'-5' trifosfāta saiti un tiek pakļauts metilēšanas modifikācijai, veidojot vāciņa struktūru Cap 1 (m7GpppN).
Dabiskās vāciņu struktūras veidošanās diagramma
Fermentatīvās ierobežošanas reakcijas plūsma ir šāda:
Linearizēta plazmīda DNS tiek izmantota kā veidne in vitro transkripcijai (IVT) T7 polimerāzes klātbūtnē, un mRNS ar 5' gala vāciņu struktūru veidojas pēc vienpakāpes attīrīšanas, izmantojot vaccinia capping enzīmu un 2'-O. -metiltransferāze.
Informācija par pakalpojumiem
Izvēles pakalpojums | Informācija par pakalpojumu | Piegādes periods (diena) |
mRNS enzīmu ierobežošana | Enzīmu aizbāžņa reakcija | 1 |
Ierobežošanas reakcijas optimizācija — pēc izvēles | Reakcijas komponentu projektēšana un optimizācija | 3 ~ 7 |
Mūsu funkcijas
- Cepšanas reakcijas komponenta projektēšana un optimizācija
Ierobežošanas reakcijas komponents ir optimizēts, un mRNS transkripta ražošana ir ievērojami palielināta.
- In vitro ekspresijas pārbaude
Aizvākotā mRNS tiek transfekēta 293T šūnās, un var noteikt mērķa proteīna ekspresiju.
Stingri kontrolējot RNaseson eksperimentālo vidi un palīgmateriālus, mRNS degradācija tiek efektīvi novērsta.
Gadījuma izpēte
Yaohai Bio-Pharma mRNS platforma ir izveidojusi perfektu ierobežošanas reakcijas procesu.
Attiecībā uz eGFP mRNS, mRNS pirmproduktu, kas sagatavots ar enzīmu ierobežošanu, pēc 293T šūnu transfekcijas 24 stundas var novērot augstu eGFP fluorescences signālu (zaļo fluorescenci), ko nosaka ar Western Blot (WB), parādot, ka mērķa proteīnu pastiprinātu zaļo fluorescējošo proteīnu (eGFP) var efektīvi ekspresēt in vitro .
Fermentatīvās eGFP mRNS ekspresija 293T šūnā
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
