Attiecībā uz mRNS masveida ražošanu in vitro transkripcija (IVT) ir efektīvāka un nobriedušāka metode. IVT reakcija izmanto linearizētu plazmīdas DNS, kas satur T7 promotoru kā veidni, un mRNS tiek sintezēta ar nukleozīdu trifosfātiem (NTP) kā substrātiem T7 RNS polimerāzes klātbūtnē.
Nukleotīdu modifikācija ir izrāviens mRNS izpētē, kur nemodificētas mRNS molekulas atpazīst intracelulārie RNS sensori, lai aktivizētu iedzimto imunitāti. Lai apsvērtu mRNS in vivo imunogenitāti un translācijas efektivitāti, IVT procesā parasti tiek izmantoti noteikta veida modificētie NTP, un parastie modificētie nukleotīdi ir pseidouridīns (Ψ), N1-metil-pseidouridīns (N1Ψ) un 5-metilcitozīns (5 mC).
MRNS in vitro transkripcijas process
In vitro transkripcijas (IVT) reakcijas diagramma
Informācija par pakalpojumiem
Izvēles pakalpojums | Informācija par pakalpojumu | Piegādes periods (darba diena) |
In vitro transkripcija (IVT) | IVT, In vitro transkripcija | 1 |
| Nukleotīdu modifikācijas (Ψ/N1Ψ/5mC utt.) |
| DNS veidnes noņemšana (DNāze I) |
IVT nosacījumu optimizācija - pēc izvēles | IVT reakcijas komponentu projektēšana un optimizācija | 2-5 |
Mūsu funkcijas
- Daudzveidīgas nukleotīdu modifikācijas stratēģijas
Uzlabojiet mRNS stabilitāti un olbaltumvielu ekspresiju in vivo.
- Stingra testa izstrāde un optimizācija
Var sasniegt mRNS fragmentu sagatavošanu līdz 10 kb.
Optimizējot IVT reakcijas apstākļus, transkripcijas ātrums ir līdz 1:200.
Stingra RNāzes kontrole, izmantojot eksperimentālo vidi un palīgmateriālus, var efektīvi novērst mRNS degradāciju.
Gadījuma izpēte
Pašreizējā IVT reakcijas sistēma ir aptuveni optimizēta sintētiskām sistēmām, kuru garums ir aptuveni 100 nt, nevis patvaļīga garuma mRNS. Jo garāka ir mRNS secība, jo grūtāk to transkribēt un jo vairāk tā ir pakļauta degradācijai.
Lai sagatavotu pielāgotas mRNS sekvences, kuru garums ir aptuveni 10 kb, Yaohai Bio-Pharma ir veiksmīgi sagatavojis augstas kvalitātes paraugus ar augstu transkripcijas attiecību 1:135 un ieguvis 135 μg sākotnēji attīrītu mRNS produktu pēc 1 μg linearizētas plazmīdas. tika transkribēts in vitro, izmantojot stingru eksperimentālu dizainu, nepārtrauktu reakcijas apstākļu optimizāciju un stingru RNāzes kontroli.
mRNS identificēšana (agarozes gēla elektroforēze)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NĒ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
