In vitro transkripcijas (IVT) mRNA sagatavošanas procesā kā IVT transkripcijas šablons ir nepieciešams lineārais plazmīdas DNA ar T7 RNA polimerēzi. Augstas kvalitātes plazmīdas DNA ir būtiska in vitro transkripcijai.
Atbalstoties uz izstrādāto plazmīdas sagatavošanas platformu, Yaohai Bio-Pharma var piedāvāt augstas tīrības un standarta lineāru plazmīdas DNA sagatavošanas pakalpojumu, lai sasniegtu efektīvu IVT transkripciju.
Procesus | Izvēles pakalpojumi | Pakalpojumu detaļas | Nodrošināšanas Periods (darbdiena) |
Cikliskā plazmīda sagatavošana | Gēnu sintēze | Ģēnu sintēze (trešām personām) | 7-10 |
Plazmīda amplifikācija | Plazmīda amplifikācija | 2 | |
Plazmīdas izņemšana | |||
Lineāras plazmīdas sagatavošana | Plazmida lineārizācija un tīrīšana | Plazmīdas lineārizācija | 1 |
DNA lineārizācijas tīrīšana | |||
Plazmīdas DNA kvalitātes kontrole | Koncentrācija un tīrība | Ultravioletā (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmīda konfigurācija | Agarozes Gela Elektrofoze (AGE) | ||
Kapilārā elektroforeze (CE)-neobligāti | |||
Plazmīdas identifikācija | Restrikcijas enzīmu identifikācija / AGE |
Linērēšanas metožu elastīga izvēle
DZP izņemšanas un tīrīšanas metožu optimizācija, lai sasniegtu augstus atgūstamie daudzumi.
Stipras procesa kontroles standarti, pētījumu vajadzībām plazmīdu paraugu superheltiskā konformitāte pārsniedz 80%.
Augsts standarts un augsta efektivitāte plazmīdu sagatavošanai un kvalitātes kontrolei, lai atbilstu eksperimenta prasībām.
Piemēram, ņemot vērā Yaohai Bio-Pharma kataloga mRNA_luciferase produktu, transkripcijas šablonplazmīdas paraugu (pētnieciskais līmenis) ir vairāk nekā 90% superheļska attiecība, lineārizācijas līmenis tuvs 100%, un nākamā transkripcijas attiecība sasniedz 1:200 (lineārizētais plazmīdas DNA:mRNA).
MRNA_luciferase, kas iegūta, izmantojot lineārizētu plazmīdu kā šablonu, tiek transficēta 293T šūnās, un enzīma-substrāta reakcijas aktivitāte novērtēta 24 stundas pēc transfekcijas.
Var noteikt skaidru un stipru luciferāza aktivitātes signālu, tas nozīmē, ka luciferāza proteins tiek efektīvi izpausts, kas liecina, ka transkripcijas šablona tīrība pilnībā apmierina augstas kvalitātes mRNA sagatavošanas prasības.
Superheļska plazmīdu attiecības analīze
Luciferāza mRNA izpausmes validācija in vitro