Salīdzinājumā ar divu soļu enzimisko apvienošanas metodi, viena solis kopā sarakstītā apvienošanas metode var pieņemami samazināt procesa plūsmu. Metode ir rezultātu orientēta un ietver kapš analogu pievienošanu in vitro transkripcijas (IVT) reakcijai. Kapš analoģi var tikt ieviesti transkripcijas sākumā, un pēc tam, kad transkripcija ir pabeigta, tiek iegūtais mRNA ar kaps struktūru. Pašreizējie trešās paaudzes kapš analogi var novērst atpakaļ apvienošanu un tieši pievienot Cap 1 struktūru transkripcijas produktam.
Ņemot vērā mRNA imunogeneratoru un tulkotāja efektivitāti dzīvā organizma vidē, IVT procesam bieži tiek izmantotas dažādas modificētās NTP, un parasti izmantotās modificētās nukleotīdes ir pseudourīdīns (Ψ), N1-metils-pseudourīdīns (N1Ψ) un 5-metilcitozīns (5mC).
Attēls: mRNA kopscriedzošanas un kapsulēšanas reakcijas diagramma
Pakalpojumu detaļas
Serviss |
Pakalpojumu detaļas |
Nodrošināšanas Periods (darbdiena) |
Kopscriedzošanās kapsulēšana |
In vitro transkripcijas atbilde (Clean Cap analogs) |
1-2 |
| Nukleotīdu modifikācijas (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Dauda veidojuma noņemšana (DNase I) |
IVT stundu optimizācija - neobligāti |
Reakcijas sastāvdaļu dizains un optimizācija |
3-7 |
Mūsu iespējas
- Dažādas nukleotīdu modifikācijas stratēģijas
Vairākas izvēles nukleotīdu modifikācijas stratēģijas var uzlabot proteīna izpausmi.
- Optimizēta reakcijas sistēma
Sasniedz augstu transkripcijas attiecību un efektīvu cappēšanas procesu.
- Stabils cappēšanas process
Sasniedz cappēšanas līmeni vairāk nekā 95%.
Efektīvi novērš mRNAs degradāciju, strauji kontrolējot RNase eksperimentālajā vidē un patēriņa līdzekļos.
Studija par praksi
Yaohai Bio-Pharma ir izveidojusi pilnībā attīstītu kopā notiekošu cappēšanas procesa platformu, izmantojot tīrus cap analogus, lai tieši pievienotu Cap1 struktūru, vienlaikus izvairoties no atpakaienes cappēšanas. Pēc standartizētās probešu priekšapstrādes un kapilāro elektroforēzes (CE) detekcijas, uzlabotā zāles fluorescentās olbaltumiera (eGFP) mRNA cappēšanas līmenis var sasniegt vairāk nekā 95%.
eGFP mRNA apvienošanas efektivitāte pārsniedz 95%.
EGFP mRNA un mCherry mRNA, kas sagatavotas ar koptranskripcijas apvienošanu, tiek transficētas 293T līdzekļos atbilstoši, un pēc 48 stundām tiek novērots spēcīgs fluoresences signāls, kas liecina, ka mRNA tiek efektīvi izpausta 293T līdzekļos.
EGFP mRNA un mCherry mRNA izpausme 293T līdzeklī
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
