Yaohai Bio-Pharma sagatavo circRNA, pamatojoties uz PIE sistēmu (eksone un introne līdzināšanu), kas atbalsta seviņu splicing funkciju, lai sasniegtu RNA ciklizāciju. PIE struktūra ir dizēta, izmantojot T4 td gēnu vai zivju tRNA priekšgēnu, un izkārtojums ir šāds:
RNA introns un atbilstošais eksona fragments tiek sadalīti divos daļās (5' termināls un 3' termināls), kur 5' terminālā sekvena pārvietojas uz mērķa sekvenas galu, 3' terminālā sekvena ievietojas priekšā mērķa sekvenai, un mērķa gēna sekvena ievietojas vidū.
GTP katalizētajā procesā PIE struktūra veicina sekvenu ciklizāciju bez intronu iekļaušanas. Kombinējot saprātīgu ciklizācijas tempa uzlabošanas stratēģiju, Yaohai Bio-Pharma var sasniegt sekvenu ciklizāciju līdz 4 kb ar vairāk nekā 80% ciklizācijas tempu.
Zīmols 1. In vitro cirkulācija circRNA, balstoties uz PIE sistēmu
Pakalpojumu sīkāki dati
| Procesus |
Izvēles pakalpojumi |
Pakalpojumu detaļas |
Nodrošināšanas Periods (darbdiena) |
| circRNA secības dizains un optimizācija |
Kodējošo sekānu izstrāde un optimizācija |
CDS sekas līdzināšana
CDS kodona optimizācija
|
1 |
| Dizains un optimizācija nekodejošajiem secībām |
Introna un ekzona sekansu dizains un optimizācija
Homoloģiskās rokas sekansu dizains un optimizācija
Dizaina un optimizācijas attēli starpībām
|
1-2 |
Parastie Stratēģijas mRNA secības dizainam
| CircRNA komponenti |
Bioloģiskās funkcijas |
Optimizācijas stratēģijas |
| Divu galu intronu un ekzonu secības |
GTP-katalizētais introna pašsplicing sekvencēm ārpus introna ciklizācijai. |
Dizinēts saskaņā ar T4 td gēnu vai zivju tauka tRNA priekšgēnu. |
| Kodējošs |
IRES |
Iekšējā ribosomas atpazīšanas vieta, kas regulē circRNA tulkotni. |
Iekšējās ribosomas ieejas vietu (IRES) secību pārbaude no dažādiem vīrusiem, piemēram, EMCV, CVB3 avotiem. |
| CDS |
Dabasainie reģioni, secības, kas kodē antigēnus, antikorpuses vai citus funkcionālus olbaltumus. |
Kodonu optimizācija palielina tulkotnes līmeni; daži neoptimālie kodoni var spēlēt lomu olbaltumu savilktībā. |
| Nenodarbojošs |
Nenodarbojošās secības |
Mērķtiecīgi miRNAs vai olbaltumus, lai izdarītu gēnu vai olbaltumu regulēšanu. |
Mērķtiecīgs specifisku saites vietu noteikšana miRNA vai olbaltumiem var atkārtot saites vietas secības. |
Mūsu iespējas
- Optimizēta PIE ciklizācijas sistēma kombinācija ar saprātīgiem optimizācijas stratēģijām, lai sasniegtu vairāk nekā 80% ciklizācijas līmeni;
- Inovatīvā CDS Optimizācijas Komandā sadarbojas profesionāls AI algoritmu komands, lai pabeigtu CDS reģiona kodonu optimizāciju;
- Pilnībā izstrādāts un apmierinošs process circRNA var tikt sasniegts ar augstu ciklizācijas efektivitāti, stabilitāti un tulkošanas efektivitāti.
Studija par praksi
Yaohai Bio-Pharma ieviesa kontroļas produktu – uzlabotu zāla fluorescences proteīnu (eGFP) circRNA, kas balstās uz PIE sistēmu, lai sasniegtu RNA ciklizāciju.
Izmantojot konvencionālu transfekcijas vielu, eGFP circRNA tiek transficēts 293T šūnās, un pēc 24 stundām var tikt noteikts eGFP (zaļš) fluorescences signāls, kas pēc 48 stundām intensificējas. Fluorescences signāls joprojām var tikt noteikts 7. un 14. dienā pēc transfekcijas.
In vitro eGFP circRNA izteiksmes validācija
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
