ADN plasmidique, comme in vitro (IVT), est une matière première importante pour la fabrication d'ARNm. Un rendement élevé, une purification élevée et une récupération élevée de l'ADN plasmidique sont les principaux objectif au cours du développement du processus plasmidique.
Yaohai Bio-Pharma fournit une solution unique pour le développement de plasmides, y compris le développement de processus en amont (fermentation), en aval (purification), la caractérisation et la validation des processus. Nous possédons une vaste expérience dans l'amélioration du rendement des plasmides et dans leur isolement de matrices complexes en développant et en optimisant les processus de fermentation, de purification et d'élimination des impuretés.
Le bioprocédé de base pour la fabrication de plasmides comprend : Escherichia coli (E. coli) fermentation, récolte cellulaire et lyse alcaline, clarification, concentration, processus de chromatographie en trois étapes (capture, purification intermédiaire et polissage) et concentration.
Détails du service | Opérations unitaires | Paramètres |
E. coli fermentation |
Agiter le flacon | Compositions des milieux, antibiotiques, volume d'inoculum, température de croissance, etc. |
Fermenteur (7 L) |
Antibiotique, volume d'inoculum, température de croissance, pH, oxygène dissous (OD), mode d'alimentation (par exemple, fed-batch), milieu d'alimentation, temps de fermentation, etc. |
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Récolte de cellules | Microfiltration | Standard E. coli processus de récolte |
Lyse cellulaire | Remise en suspension cellulaire, lyse alcaline, neutralisation | Rapport alcalin, temps de lyse |
Clarification | Filtration | Filtration brute, 20 µm et un train de filtres de 5 µm (de préférence) |
Concentration | Ultrafiltration, filtration à flux tangentiel | Taille des pores (ou NMWC), pression transmembranaire (TMP), flux, rapport volume du filtrat/surface de la membrane |
Chromatographie en trois étapes | Chromatographie d'exclusion de taille (SEC) ou chromatographie par filtration sur gel (GFC) | Longueur et diamètre de la colonne, composition du tampon, volume d'injection, composition de la phase mobile (adsorption et désorption), pH, débit, conditions d'équilibrage, de liaison, de lavage et d'élution. |
Chromatographie d'affinité (AF) | ||
Chromatographie d'échange d'anions (AEX) | ||
Concentration | Ultrafiltration, filtration à flux tangentiel | Taille des pores (ou NMWC), pression transmembranaire (TMP), flux, rapport volume du filtrat/surface de la membrane |
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