Σύνθεση mRNA εκτός ζωικού οργανισμού
Τα κύρια συστατικά του mRNA είναι το 5’-cap, το 5’-UTR, ο ανοικτός περιορισμένος φράμα (ORF), το 3’-UTR και η 5’ poly A ουρά, τα οποία είναι απαραίτητα για τη διατήρηση της λειτουργίας του mRNA. Έρευνες έχουν χρησιμοποιήσει μια ποικιλία μεθόδων για να αναγνωρίσουν και να βελτιώσουν τις ακολουθίες και τις δομές του mRNA.
Η σύνθεση του mRNA εκτελείται με βάση την εκτός ζωικού οργανισμού μεταφορά (IVT) χρησιμοποιώντας γραμμιαίες DNA πλατφόρμες, RNA πολυμεράσεις (T3, T7 ή SP6), άνευ ή με τροποποιημένα νουκλεοτιδία, ένζυμα και κατάλληλα φάρμακα.
Τροποποίηση 5’ Cap
Οι ακολουθίες του περιφτυγμένου mRNA από ευκαρυωτικά κύτταρα δείχνουν μια κάπου 7-μεθυλγουανοσίνη (m7G) στο άκρο 5', η οποία βελτιώνει τη σταθερότητα του mRNA και την αποδοτικότητα μετάφρασης. υπάρχουν δύο γενικές μεθόδους για την απομονωμένη λήψη του mRNA εξωτερικά. Πρώτον, το mRNA μπορεί να φράζεται με την προσθήκη ενός ανάλογου κάπου με δομή m7GpppG (π.χ., CleanCap) στο σύστημα IVT. Αυτή η μέθοδος φραγμού κατά τη διάρκεια της γραφής παρέχει μια φυσιολογική δομή κάπου 5' και αυξάνει την αποτελεσματικότητα φραγμού σε σχεδόν 90-99%. Δεύτερον, η χάρτηση του mRNA μπορεί επίσης να επιτευχθεί με αποτελέσματα από αποστερεωτικές αντιδράσεις μετά την απομονωμένη γραφή.
Παραλλαγή PolyA
Ο πολύς(A) ουρά επεκτείνει επίσης τη μισή ζωή του mRNA ενδονομικά και βελτιώνει την αποτελεσματικότητα μετάφρασης του mRNA. Η μήκος της ενισχυμένης πολύς(A) ουράς θα πρέπει να είναι 100-300 νουκλεοτίδες. Επιπλέον, η τροποποιημένη αδενοσίδιο αυξάνει τη σταθερότητα της πολύς A ουράς εναντίον της κατάρρευσης από κυτταρικές RNase. Η πολύς A ουρά μπορεί να εισαχθεί μέσω μεταγωγής in vitro χρησιμοποιώντας DNA πρότυπο που κωδικοποιεί την πολύς A, με αποτέλεσμα μια συγκεκριμένη μήκος ακολουθίας πολύς A. Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί αναβαθμισμένη πολύς A πολυμεράση με ενζυματική πολυαδενύλωση μετά τη μεταγωγή του mRNA.
Τροποποίηση Νουκλεοτιδίων
Οι τροποποιημένες νουκλεοσίδες μπορούν να εμποδίζουν την ανάγνωση και/ή ενεργοποίηση από τα ρεσεπτόρ ομαλής ανίχνευσης (PRR) και να ενισχύουν την αποτελεσματικότητα των εμβολίων mRNA με δύο εντελώς διαφορετικούς τρόπους. Η προσθήκη συγκεκριμένων χημικά τροποποιημένων νουκλεοσίδων, συμπεριλαμβανομένων της ψευδοϋριδίου (ψ), της 1-μεθυλψευδοϋριδίου (m1ψ), της θιοϋριδίου (s4U) και της 5-μεθυλκυτοσίνης (m5C), μπορεί να εμποδίσει την ενεργοποίηση των TLR7/8 και άλλων ρεσεπτόρ του φυσικού ανοσοποιητικού συστήματος, που μειώνει σημαντικά την ανοσοποιητική τους ικανότητα.
Σύστημα Μεταφοράς mRNA
Για να διατηρηθεί η λειτουργία του mRNA, αυτό πρέπει να εισέλθει στο κυτταρικό κυτταρόπλασμα του ξενικού και να εκφράσει συγκεκριμένα αντιγόνα. Μία από τις πιο δύσκολες προκλήσεις που αντιμετωπίζουν τα εμβόλια και θεραπευτικά mRNA είναι η μεταφορά του mRNA σε στόχο-κύτταρα με αρκετά υψηλά επιπέδα μετάφρασης, για το οποίο απαιτείται ένα σύστημα μεταφοράς mRNA που είναι εξαιρετικά συγκεκριμένο και αποτελεσματικό. Έχουν αναπτυχθεί και χρησιμοποιηθεί διάφορα διανοστικά διανομέα mRNA, συμπεριλαμβανομένων των δενδριτικών κυττάρων (DCs), της πρωταμίνης, των κατιονικών πολυμερών και των κατιονικών λιποσωμάτων.
Σύνθετα κατιονικών λιπιδίων με mRNA και άλλες προετοιμασίες μπορούν να σχηματίσουν συλλογικά νανοψήφια σωματίδια μεγέθους 80-200 nm, γνωστά ως νανοσωματίδια λιπιδίων (LNPs). Ως ένας από τους πιο προηγμένους συστήματες μεταφοράς mRNA, το LNP περιλαμβάνει ιονοποιημένα κατιονικά λιπίδια, φυσικά φοσφολιπίδια, χοληστερόλη και πολυηθυληνογλυκόλ (PEG). Αρκετά εμβολία RNA και θεραπείες (siRNA και mRNA) που έχουν εγκριθεί από την Αμερικανική Αρχή Φαρμάκων και Διαιτητικών Προϊόντων βασίζονται σε συστήματα μεταφοράς LNPs.
Yaohai Bio-Pharma Προσφέρει Ολοκληρωμένη Λύση για RNA
Προσαρμοσμένα Παραδόσιμα
|
Βαθμός
|
Αποτελέσματα
|
Περιγραφή
|
Εφαρμογές
|
|
χωρίς GMP
|
Φαρμακευτική Ουσία, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Προκινητική έρευνα όπως εισαγωγή κυττάρων, Ανάπτυξη αναλυτικών μεθόδων, Προ-μελέτες σταθερότητας, Ανάπτυξη διατύπωσης
|
|
Φαρμακευτικό Προϊόν, LNP-mRNA
|
|
GMP, Στερεότητα
|
Φαρμακευτική Ουσία, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Έγκριση νέου φαρμάκου (IND), Έγκριση προσωρινής πειραματικής θεραπείας (CTA), Εφοδιασμός για κλινικές δοκιμές, Άδεια εμπορικής κυκλοφορίας βιολογικού φαρμάκου (BLA), Εμπορικός εφοδιασμός
|
|
Φαρμακευτικό Προϊόν, LNP-mRNA
|
5000 φιάλες ή προχωρισμένα συριγγοειδή/καρτρίτσες
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
