το mRNA χρησιμοποιείται ευρέως στη μελέτη των λειτουργιών των γενών ή των πρωτεϊνών. Επίσης, είναι συνηθισμένο στην ανάπτυξη προφυλακτικών και θεραπευτικών βιολογικών. Ως κοινή στρατηγική σύνθεσης RNA μορίων, η εκτροφή εκτός οργανισμού (IVT) μας επιτρέπει να αποκτήσουμε προσαρμοσμένα μεταφράσματα αποτελεσματικά.
Το Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει ένα σύνολο τεχνολογιών σύνθεσης mRNA για να παρέχει υψηλής ποιότητας RNA, όπως σχεδιασμός και βελτιωμένος σειράς, IVT, καθαρισμός, ανυδροποίηση και περιεγκλεισμό σε λιπιδικά νανοσωμάτια (LNP). Όλα τα προϊόντα απελευθερώνονται με αυστηρά πρότυπα ελέγχου ποιότητας (QC).
Με την έναρξη της πανδημίας COVID-19 το 2020, η τεχνολογία mRNA έχει προελθεί με κάμποσα βήματα μπροστά, και η σχετική έρευνά της και εφαρμογές έχουν αποκτήσει απροηγούμενη ανάπτυξη, συμπεριλαμβανομένων των προφυλακτικών εμβολίων για την πρόληψη λοιμωτικών νόσων, θεραπευτικών εμβολίων καρκίνου και φαρμάκων, θεραπείας καρκίνου, θεραπείας αντικατάστασης πρωτεΐνων, αναγεννητικής ιατρικής και κυτταρικής και γενετικής θεραπείας (CGT).
εμβολία mRNA | φαρμακευτικά mRNA |
|
Διαδικασία | Επιλογές Υπηρεσίες | Λεπτομέρειες Υπηρεσίας | Περίοδος Παράδοσης (εργασιακή μέρα) | Αποτέλεσμα |
σχεδιασμός και Βελτιωμένη Ακολουθία mRNA | Σχεδιασμός και βελτίωση κωδικοποιημένων ακολουθιών | Σχεδιασμός ακολουθίας CDS και βελτίωση κωδικού | 1-3 | Αρχείο ακολουθίας |
Σχεδιασμός και βελτιωτική ανάπτυξη μη κωδικών ακολουθιών | Σχεδιασμός και βελτιωτική ανάπτυξη UTR, ακολουθιών polyA | |||
Προετοιμασία πλάσμιδας υποδειγματικού για τη μεταφορά | Προετοιμασία ανασυνδυασμένων πλάσμιδων | Σύνθεση γονιδίου | 7-10 | |
Επαναγωγή και εξαγωγή πλάσμιδων | 4 | |||
Γραμμικοποίηση και καθαρισμός πλάσμιδων | ||||
μεταφορά mRNA εκτός οργανισμού | Συνδυασμένη κάλυψη (μέθοδος μιας φάσης) | Μεταφορά εκτός οργανισμού (IVT) / Ανάλογο κάπου | 1-2 | Μη Διαθέσιμο |
Τροποποιήσεις νουκλεοτίδων (τροποποιήσεις UTP/CTP) | ||||
Αφαίρεση προτύπου DNA (DNase I) | ||||
Ενζυματική κάπαξη (διαδικασία δύο βημάτων) | IVT | 2-3 | ||
Τροποποιήσεις νουκλεοτίδων (τροποποιήσεις UTP/CTP) | ||||
Αφαίρεση προτύπου DNA (DNase I) | ||||
καθαρισμός mRNA (χλωρίδιο λιθίου/μαγνητικά σφαιράκια) | ||||
Ενζυματική κάπαξη | ||||
καθαρισμός mRNA | Συνηθισμένη διαδικασία καθαρισμού | Προβολή με χλωρίδιο λιθίου | 1 | υλικό φαρμακευτικού mRNA |
Καθαρισμός με μαγνητικά σφαιράκια | ||||
Διαδικασία καθαρισμού με στήλη χρωματογράφησης | Συνδυασμός πολλαπλών μεθόδων χρωματογραφίας | 1-2 | ||
Αντικατάσταση φυσικού | Υπερδιήθηση | 1 | ||
αποψύχωση mRNA | Λυοφιλικοποίηση | Προ-ψύξη | 2-3 | λυοφιλικοποιημένο φωτιστικό RNA |
Κύρια ξηρασία (υπολήψις) | ||||
Δευτερεύουσα ξηρασία (απορροφητικότητα) | ||||
εγκαψολισμός mRNA | Ενκάψυμα LNP | Ενκάψυμα LNP | 2-3 | φαρμακευτικό προϊόν mRNA-LNP |
Συγκέντρωση και αντικατάσταση φυσικού | ||||
ανάλυση Ποιότητας mRNA | υλικό φαρμακευτικής ουσίας mRNA / ανυδρατωμένο πουδρό | Συγκέντρωση, καθαρότητα | 1 | Έκθεση δοκιμής |
Ολοκληρότητα, αποδοτικότητα κάπνισης, κατανομή ουράς polyA | 2-5 | |||
φαρμακευτικό προϊόν mRNA-LNP | Αποτελεσματικότητα Εγκάψης | 1 | ||
Μέγεθος και κατανομή σωματιδίων | ||||
Έλεκτροστατική φορτίωση | ||||
επαλήθευση Έκφρασης mRNA | αξιολόγηση κυττάρων 293T | Τοποθέτηση κυττάρων | 4 | |
Προσωρινή παραγωγή κυττάρων | ||||
Παρατήρηση φλεγμονικού σήματος | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Ενζυμοσυνδεδεμένη αναφορική δοκιμασία (ELISA) |
κάπ 5' |
▪ Άνευ κάπ ▪ Cap0, συνδυασμένο κάπ ▪ Cap1, συνδυασμένο κάπ ▪ Cap1, ενζυματική τοποθέτηση κάπ |
5’ UTR/3’ UTR |
▪ Φύσης UTR ακολουθία ▪ Μεταβλητή/Μηχανική UTR ακολουθία |
3' PolyA Δευτερόλογο |
▪ 100A ~120A Δευτερόλογο (συστεματικά) ▪ Διαιρετικό polyA δευτερόλογο ▪Άλλα περιστατικά δευτερόλογα |
Τροποποιημένα νουκλεοσίδια |
▪ Άνευ τροποποιήσεων βάσεις ▪ Ψευδοϋρινόδιο (Ψ) ▪ N1-Methylpseudouridine (N1Ψ) ▪ 5-methylcytosine (m5C) ▪ 5-methyluridine (m5U) ▪ 5-methoxyuridine (5moU) ▪ 2-thiouridine (s2U) ▪ 2′-O-methyl-U ▪ Άλλες τροποποιήσεις |
Εντεγραμμένος Ροής Υπηρεσιών
Παρέχει μια σειρά υπηρεσιών από την προεπιλογή σχεδίου στον πρώτο άξονα μέχρι την παρασκευή mRNA, τον έλεγχο ποιότητας και την επαλήθευση έκφρασης.
Διεθνής Πρωτοποριακός Σχεδιασμός και Βελτιωμένος Στοιχειοθεσίας
Η επαγγελματική σχεδίαση και βελτιωμένος ρυθμός του mRNA επιτρέπει αποτελεσματική έκφραση mRNA.
Διαφοροποιημένες Πυρήνειες Παραλλαγές
Αποτελεσματικά αυξάνουν την έκφραση mRNA και μειώνουν τις αρνητικές ανοσολογικές αντιδράσεις του mRNA.
Ενδιαφερόμενη Επεξεργασία Καθαρισμού
Με τη συνδυασμένη χρήση συνηθισμένων και δικαιοκτησίας μεθόδων καθαρισμού, αποκτούνται δείγματα mRNA με υψηλή καθαρότητα.
Ολοκληρωμένη Πλατφόρμα Ελέγχου Ποιότητας
Πλουσιοποιούνται οι επιλογές έλεγχου ποιότητας για να καλύπτουν τις απαιτήσεις κανονικών ελέγχων, όπως συγκέντρωση, καθαρότητα A260/280 και ακεραιότητα, καθώς και υψηλές απαιτήσεις ελέγχου ποιότητας, όπως αποτελεσματικότητα καπέλου/κατανομή polyA.
Γρήγορη παράδοση
Το παραγωγικό mRNA μπορεί να παραχωρηθεί σε 7 ημέρες, εκτός από την εξωτερική σύνθεση ακολουθίας.