η κατάθεση στο 5'-τέλος είναι μια απαραίτητη τροποποίηση του mRNA. Τα mRNA με δομές καπέλου, ειδικά με δομές Cap1, βοηθούν τα mRNA να αποφύγουν τις φυσικές ανοσοποιητικές απαντήσεις μέσα στο οργανισμό, προκαλώντας αποδοτική μετάφραση πρωτεΐνων.
Η ενζυματική κατάθεση (η διαδικασία δύο βημάτων) είναι η παραδοσιακή μέθοδος κατάθεσης mRNA, παρόμοια με τη διαδικασία κατάθεσης στα ευκαρυωτικά οργανισμούς. Υπό την επίδραση μιας σειράς ενζυμών, το 7-methylguanine (m7G) συνδέεται με το 5'-τέλος του mRNA μέσω ενός δεσμού 5'-5' τριφοσφάτου και υποβάλλεται σε μεθυλοποίηση για να δημιουργηθεί η δομή καπέλου Cap 1 (m7GpppN).
Διάγραμμα της φυσικής διαδικασίας δημιουργίας καπέλου
Ο ρολόγιος της ενζυματικής αντίδρασης κατάθεσης είναι ο εξής:
Η γραμμικοποιημένη DNA πλάσματος χρησιμοποιείται ως πρότυπο για την εξωτοκική μεταφορά (IVT) στην παρουσία της πολυμεράσης T7, και η mRNA με δομή κάπου στο 5' άκρο παράγεται μετά από μια καθαρισμού σε μια μέρα με τη χρήση της ενζύμου κάπινγκ της vaccinia και της 2'-O-μεθυλμεταφοράσης.
Λεπτομέρειες Υπηρεσιών
Επιλογές Υπηρεσίες |
Λεπτομέρειες Υπηρεσίας |
Περίοδος Παράδοσης (Ημέρα) |
ένζυματική Καποποίηση mRNA |
Ενζυματική αντίδραση κάπινγκ |
1 |
Βελτιστοποίηση αντίδρασης κάπινγκ - προαιρετική |
Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση των συστατικών της αντίδρασης |
3~7 |
Οι Προσφερόμενες Ικανότητες
- Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση των συστατικών της αντίδρασης κάπινγκ
Τα συστατικά της αντίδρασης κάπινγκ βελτιώνονται και η παραγωγή της μεταγραφής mRNA αυξάνεται σημαντικά.
- Επαλήθευση εξωτοκικής έκφρασης
Η καπούμενη mRNA εισάγεται σε κύτταρα 293T, και η έκφραση του στόχου πρωτεΐνης μπορεί να ανιχνευθεί.
- Αυστηρή ελέγχωση της RNase
Μέσω αυστηρής ελέγχωσης των RNases στο πειραματικό περιβάλλον και τα υλικά, η διάβρωση του mRNA προλαμβάνεται αποτελεσματικά.
Μελέτη περιπτώσεων
Η πλατφόρμα mRNA της Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει έναν τέλειο διαδικαστικό χώρο για την αντιδρασία καπνού.
Για το eGFP mRNA, ένα μεταξύ προϊόν mRNA που ετοιμάζεται με ζυμωδή κάπνωση, μπορεί να παρατηρηθεί έναρξη φωτισμού eGFP (πράσινος φωτισμός) σε υψηλό επίπεδο 24 ώρες μετά τη μεταφορά σε κύτταρα 293T, η οποία ανιχνείται με Western Blot (WB), δείχνοντας ότι το στόχο πρωτεΐνη ενισχυμένη πράσινη φλεγμονική πρωτεΐνη (eGFP) μπορεί να εκφραστεί αποτελεσματικά in vitro.
Εκφράσεις Ζυμωδώς Καπνωμένου eGFP mRNA στα Κύτταρα 293T
EL
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
