Όσον αφορά τη μαζική παραγωγή mRNA, η in vitro μεταγραφή (IVT) είναι μια πιο αποτελεσματική και ώριμη μέθοδος. Η αντίδραση IVT υιοθετεί γραμμικοποιημένο πλασμιδιακό DNA που περιέχει τον προαγωγέα Τ7 ως εκμαγείο και το mRNA συντίθεται με τριφωσφορικούς νουκλεοζίτες (NTPs) ως υποστρώματα παρουσία πολυμεράσης Τ7 RNA.
Η τροποποίηση νουκλεοτιδίων είναι μια σημαντική ανακάλυψη στην εξερεύνηση του mRNA, όπου τα μη τροποποιημένα μόρια mRNA αναγνωρίζονται από ενδοκυτταρικούς αισθητήρες RNA για να ενεργοποιήσουν την έμφυτη ανοσία. Για τις εκτιμήσεις της in vivo ανοσογονικότητας και της αποτελεσματικότητας μετάφρασης του mRNA, η διαδικασία IVT συνήθως χρησιμοποιεί ορισμένα είδη τροποποιημένων NTPs και κοινά τροποποιημένα νουκλεοτίδια είναι η ψευδουριδίνη (Ψ), η Ν1-μεθυλ-ψευδουριδίνη (Ν1Ψ) και η 5-μεθυλκυτοσίνη (5 mC).
Διαδικασία μεταγραφής in vitro του mRNA
Διάγραμμα αντίδρασης μεταγραφής in vitro (IVT).
Στοιχεία υπηρεσιών
Προαιρετική εξυπηρέτηση |
Λεπτομέρειες υπηρεσιών |
Περίοδος παράδοσης (Εργάσιμη ημέρα) |
Μεταγραφή in vitro (IVT) |
IVT, in vitro μεταγραφή |
1 |
| Τροποποιήσεις νουκλεοτιδίων (Ψ/N1Ψ/5mC, κ.λπ.) |
| Αφαίρεση προτύπου DNA (DNase I) |
Βελτιστοποίηση συνθηκών IVT - προαιρετικό |
Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση στοιχείων αντίδρασης IVT |
2-5 |
Τα χαρακτηριστικά μας
- Διαφοροποιημένες στρατηγικές τροποποίησης νουκλεοτιδίων
Βελτιώστε τη σταθερότητα του mRNA και την έκφραση πρωτεΐνης in vivo.
- Αυστηρός σχεδιασμός και βελτιστοποίηση δοκιμών
Μπορεί να επιτευχθεί προετοιμασία θραύσματος mRNA έως 10 kb.
Με τη βελτιστοποίηση των συνθηκών αντίδρασης IVT, ο ρυθμός μεταγραφής είναι έως και 1:200.
Ο αυστηρός έλεγχος της RNase μέσω ενός πειραματικού περιβάλλοντος και αναλώσιμων μπορεί να αποτρέψει αποτελεσματικά την αποικοδόμηση του mRNA.
Case Study
Το τρέχον σύστημα αντίδρασης IVT είναι κατά προσέγγιση βελτιστοποιημένο για συνθετικά συστήματα με μήκος περίπου 100 nt, όχι για mRNA αυθαίρετου μήκους. Όσο μεγαλύτερη είναι η αλληλουχία του mRNA, τόσο πιο δύσκολη είναι η μεταγραφή και τόσο πιο επιρρεπής σε αποικοδόμηση.
Προκειμένου να παρασκευαστούν προσαρμοσμένες αλληλουχίες mRNA με μήκος περίπου 10 kb, η Yaohai Bio-Pharma έχει παρασκευάσει με επιτυχία δείγματα υψηλής ποιότητας με υψηλή αναλογία μεταγραφής 1:135 και έλαβε 135 μg αρχικά καθαρισμένων προϊόντων mRNA μετά από 1 μg γραμμικού πλασμιδίου μεταγράφηκε in vitro μέσω αυστηρού πειραματικού σχεδιασμού, συνεχούς βελτιστοποίησης των συνθηκών αντίδρασης και αυστηρού ελέγχου της RNase.
Αναγνώριση mRNA (ηλεκτροφόρηση γέλης αγαρόζης)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
