Το κυκλικό mRNA (circRNA) έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη μελέτη των λειτουργιών των γενών ή πρωτεινών. Επίσης, είναι δηλοφάνεια στην ανάπτυξη προφυλακτικών και θεραπευτικών βιολογικών, παρόμοια με το mRNA.
Η Yaohai Bio-Pharma έχει αναπτύξει μια σειρά τεχνολογιών σύνθεσης circRNA για να παρέχει υψηλής ποιότητας RNA, όπως σχεδιασμός και βελτιωμένη ακολουθία, εκτροφή εκτός οργανισμού (IVT), κυκλοποίηση, καθαρισμός και περιεγχώρηση σε λιπιδικά νανοσωματίδια (LNP).Όλα τα προϊόντα απελευθερώνονται με τις αυστηρές πρότυπα ελέγχου ποιότητας (QC).
Σε σύγκριση με το γραμμικό mRNA, το κυκλικό RNA (circRNA) είναι πιο σταθερό σε δομή και αποτελεί κύριο θερμό σημείο στην τρέχουσα έρευνα φαρμάκων νουκλεϊκών οξειδίων. Διαθέτει ευρεία εφαρμογή σε διάφορους τομείς, είτε ως κωδικοποιημένο circRNA ή ως μη κωδικοποιημένο circRNA, περιλαμβανομένων των προφυλακτικών εμβολίων για λοιμώξεις, θεραπευτικών εμβολίων για τον καρκίνο, θεραπευτικών φαρμάκων για τον καρκίνο, θεραπείας αντικατάστασης πρωτεΐνης, αναγεννητικής ιατρικής, θεραπείας κυττάρων και γονιδίων (CGT), ρόλου μοριακού σπόγγα και RNA aptamer.
Διαδικασία | Επιλογές Υπηρεσίες | Λεπτομέρειες Υπηρεσίας | Περίοδος Παράδοσης (Ημέρα) |
σχεδιασμός και Βελτιωμένη Ανάλυση circRNA | Σχεδιασμός και βελτίωση κωδικοποιημένων ακολουθιών | Βελτιωμένη κωδικοποίηση CDS | 1 |
Σχεδιασμός και βελτιωτική ανάπτυξη μη κωδικών ακολουθιών | Σχεδιασμός και Βελτιωμένη Ανάλυση Τμημάτων Intron και Exon, Ομοιότητας Arm και Spacer | 1-2 | |
Παρασκευή Κυκλικού Πλάσματος | Σύνθεση γονιδίου | Σύνθεση Γονιδίου (Τρίτων Παρόχων) | 7-10 |
Επαμφότερη Επέκταση Plasmid | Επαμφότερη Επέκταση Plasmid | 2 | |
Απόσταγμα Plasmid | |||
Προετοιμασία Γραμμικού Plasmid | Γραμμικοποίηση και καθαρισμός πλάσμιδων | Γραμμικοποίηση πλάσμιδων | 1 |
Καθαρισμός Γραμμικοποιημένου DNA | |||
Μετάφραση Έξω από το Σώμα και Κυκλοποίηση | Μετάφραση Έξω από το Σώμα και Κυκλοποίηση | Αντιδράσεις Μετάφρασης Έξω από το Σώμα και Κυκλοποίησης | 1-2 |
Χονδροποίηση με RNase R | |||
Βελτιωμένο-προαιρετικό | Σύνθεση Αντίδρασης, Βελτιωμένος Χρόνος | 2-5 | |
καθαρισμός circRNA | Τυπική Μέθοδος Καθαρισμού | Προβολή με χλωρίδιο λιθίου | 1 |
Καθαρισμός με μαγνητικά σφαιράκια | 1 | ||
Υψίστης Καθαρότητας circRNA Καθαρισμός | Προπαρασκευαστική Υψηλής Απόδοσης Υγρή Χρωματογράφηση (HPLC) | 1-2 | |
Αντικατάσταση φυσικού | Υπερδιήθηση | 1 | |
αποξήρανση circRNA | Γεμισμός Εξαμής | Γεμίσματα | 2-3 |
Λυοφιλικοποίηση | Προ-ψύξη | ||
Κύρια ξηρασία (υπολήψις) | |||
Δευτερεύουσα ξηρασία (απορροφητικότητα) | |||
εγκαθέτηση circRNA-LNP | Ενκάψυμα LNP | Προεπεξεργασία Υλικού και Υγρών | 2 |
Αναμιγμή σε Μικρορροφικό Συστήμα | |||
Αντικατάσταση φυσικού | Φιλτράρισμα με Επιφανειακή Ροή | 1 | |
Στερείλωμα | Διήθηση | ||
Έλεγχος Ποιότητας Plasmid DNA | Συγκέντρωση/καθαρότητα | Ακτινοβολική Περιβολή (UV) Φασματοφωτομετρία | 1-2 |
Μορφή Plasmid | Ηλεκτροφόρηση σε Αγαρωσή (AGE) | ||
Καπιλλαρή Ηλεκτροφόρηση (CE) - Παραλλαγή | |||
Εξαγωγή Plasmid | Διάκριση Περιοριστικού Ενζυμού/Ηλεκτροφόρηση σε Αγαρωσή Γελ (AGE) | ||
Έλεγχος ποιότητας circRNA | Συγκέντρωση/καθαρότητα | Ακτινοβολική Περιβολή (UV) Φασματοφωτομετρία | - |
Καθαρότητα | Ηλεκτροφόρηση σε Αγαρωσή Γελ (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - παραλλαγή | 1 | ||
Έλεγχος Ποιότητας circRNA-LNP | Αποτελεσματικότητα Εγκάψης | Μέθοδος RiboGreen | 1 |
Μέγεθος σωματιδίων | Δυναμική Σκέδαση Φωτός (DLS) | 1 | |
Δείκτης Πολυδιασπορίας | Δυναμική Σκέδαση Φωτός (DLS) | 1 | |
Ζήτα Δυναμική | Δυναμική Σκέδαση Φωτός (DLS) | 1 | |
Δοκιμή Ισχύος Με βάση Κύτταρα | Μεταφορά Κυττάρων | Ανάρτηση κυττάρων, μεταφορά κυττάρων | 4 |
Ανίχνευση Στόχου Πρωτεΐνης | Παρατήρηση φθορισμού, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Επιβεβαιώσαμε τη μεταφορά της ενισχυμένης πράσινης φθοριστικής πρωτεΐνης circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA σε κύτταρα 293T, και ανίχνευσαμε τη στόχο πρωτεΐνη μέσω φθορισμού, φωτεινής ή χρωματικής σήμασης, western blot (WB), ενζυματικής δοκιμής συνδεδεμένων αντιγόνων (ELISA).
Δοκιμές Ισχύος Με βάση Κύτταρα για δείγματα circRNA από Yaohai Bio-Pharma