Η παρασκευή CircRNA απαιτεί γραμμικό RNA ως πρώτη υλική (RNA προγενές) για την κυκλικοποίηση, όπου το προγενές RNA ετοιμάζεται συνήθως με τη χρήση γραμμικοποιημένου DNA πλάσματος ως υποδείγματος μεταγωγής και μεταγράφεται εξωτερικά με τη βοήθεια της πολυμεράσης RNA T7.
Το υψηλής ποιότητας DNA πλάσματος είναι απαραίτητο για την εξωτερική μεταγωγή (IVT). Βασιζόμενο στην εξελιγμένη πλατφόρμα υπηρεσίας παρασκευής πλάσματος, το Yaohai Bio-Pharma μπορεί να προσφέρει μια υπηρεσία παρασκευής υψηλής καθαρότητας και προτύπου γραμμικοποιημένου DNA πλάσματος (pDNA) για να εξασφαλίσει την ακεραιότητα των προϊόντων IVT.
Διαδικασία | Επιλογές Υπηρεσίες | Λεπτομέρειες Υπηρεσίας | Περίοδος Παράδοσης (εργασιακή μέρα) |
Παρασκευή Κυκλικού Πλάσματος | Σύνθεση γονιδίου | Σύνθεση Γονιδίου (Τρίτων Παρόχων) | 7-10 |
Επαμφότερη Επέκταση Plasmid | Επαμφότερη Επέκταση Plasmid | 2 | |
Απόσταγμα Plasmid | |||
Προετοιμασία Γραμμικού Plasmid | Γραμμικοποίηση και καθαρισμός πλάσμιδων | Γραμμικοποίηση πλάσμιδων | 1 |
Καθαρισμός Γραμμικοποιημένου DNA | |||
Έλεγχος ποιότητας DNA πλάσμιδας | Συγκέντρωση καθαρότητα | Ακτινοβολική Περιβολή (UV) Φασματοφωτομετρία | 1-2 |
Μορφή Plasmid | Ηλεκτροφόρηση σε Αγαρωσή (AGE) | ||
Καπιλλαρή Ηλεκτροφόρηση (CE) - Παραλλαγή | |||
Εξαγωγή Plasmid | Διάκριση ενζύμων περιορισμού / AGE |
Ευέλικτη επιλογή μεθόδων γραμμικοποίησης
Βελτιστοποίηση των μεθόδων εξαγωγής και καθαρισμού DNA για να επιτευχθούν υψηλοί ρυθμοί ανάκτησης.
Αυστηροί πρότυποι ελέγχου διεργασιών, με ρυθμό υπερελικοειδούς σχήματος πλάσματος για έρευνα πάνω από το 80%.
Υψηλού προτύπου και υψηλής αποδοσης υπηρεσίες παρασκευής και ελέγχου ποιότητας πλάσματος για να καλύψουν τις πειραματικές ανάγκες.
Χρησιμοποιώντας ως παράδειγμα το προϊόν mCherry circRNA της Yaohai Bio-Pharma, ο ποσοστιαίος μέτρων αναλομικός των δειγμάτων πλάσμιδων προtypoύ (ερευνητικής κατηγορίας) είναι πάνω από 70%, με βαθμό γραμμικοποίησης σχεδόν 100%.
το mCherry circRNA ετοιμάζεται με γραμμικοποιημένο πλάσμιδο ως πρότυπο και μεταφέρεται σε κύτταρα 293T. Εντοπίζεται υψηλό επίπεδο έκφρασης φωτιστικότητας (κόκκινη φωτιστικότητα) μετά από 24 ώρες μεταφοράς, το οποίο ενισχύεται μετά από 48 ώρες και μπορεί να εντοπιστεί ακόμη και στις 7η και 14η μέρες μετά την μεταφορά.
το πρωτεΐνη mCherry εξαγορεύεται σταθερά και αποτελεσματικά, και η καθαρότητα του προτυπικού μορίου μπορεί να καλύψει τις απαιτήσεις του φαρμακολογικού προϊόντος circRNA (DP) υψηλής ποιότητας.
Επαλήθευση εκφράσεως in vitro του mCherry circRNA