Η βάση της ενθυλάκωσης είναι ο σχεδιασμός και η ανάπτυξη του συστήματος παράδοσης. Ένα καλά σχεδιασμένο σύστημα χορήγησης επιτρέπει στα μόρια circRNA να εισέλθουν στο σώμα χωρίς να αποικοδομηθούν από τα ένζυμα RNA και στη συνέχεια να παραδοθούν αποτελεσματικά στη θέση στόχο, να διασχίσουν την κυτταρική μεμβράνη και να απελευθερωθούν ενδοκυτταρικά.
Τα νανοσωματίδια λιπιδίων (LNP) είναι το καλύτερο διαθέσιμο σύστημα διανομής, με πλεονεκτήματα στην ενθυλάκωση, στην έκφραση in vivo και στην ασφάλεια in vivo σε σύγκριση με άλλα συστήματα παροχής. Τα LNP με θραύσματα νουκλεϊκού οξέος καταπίνονται εύκολα στα κύτταρα και σχηματίζουν ενδοκυτταρικά σώματα. Μόλις εισέλθει στο κύτταρο, το όξινο περιβάλλον του ενδοκυτταρικού σώματος πρωτονιώνει και φορτίζει θετικά την κεφαλή του ιονισμένου λιπιδίου, συντήκοντας έτσι με την εσωτερική μεμβράνη του ενδοκυτταρικού σώματος και απελευθερώνοντας το νουκλεϊκό οξύ στόχο στο κύτταρο για δράση.
Η υπηρεσία circRNA της Yaohai Bio-Pharma συνεχίζει να βελτιώνεται και μπορεί να παρέχει υπηρεσία ενθυλάκωσης circRNA-LNP για τη βελτιστοποίηση των σχετικών κρίσιμων παραμέτρων διαδικασίας και τη βελτίωση της συνέπειας και της αναπαραγωγιμότητας της παραγωγής φαρμάκου circRNA.
Διαδικασία | Λεπτομέρειες υπηρεσιών | Περίοδος παράδοσης (Ημέρα) | Παραδοτέα |
ενθυλάκωση circRNA-LNP | Προεπεξεργασία υλικού και υγρού | 2 | φαρμακευτικό προϊόν circRNA-LNP (DP) |
Ανάμειξη μικρορευστών συσκευών | |||
Διήθηση εφαπτομενικής ροής | 1 | ||
Διήθηση αποστείρωσης | |||
Έλεγχος ποιότητας circRNA-LNP | Αποτελεσματικότητα ενθυλάκωσης | 1 | Έκθεση δοκιμής |
Μέγεθος σωματιδίων και δείκτης πολυδιασποράς | |||
Ζήτα δυναμικό |
Γρήγορη σύνθεση, υψηλή απόδοση Ε&Α και προ-βελτιστοποιημένες λύσεις.
Η αναλογία ενθυλάκωσης μπορεί να φτάσει περισσότερο από 90%.
Το μέγεθος των νανοσωματιδίων λιπιδίων μπορεί να ελεγχθεί αλλάζοντας τον ρυθμό και την αναλογία έγχυσης υγρού.
Τα προϊόντα circRNA-LNP επικυρώνονται με έκφραση κυττάρου in vitro και μπορούν να εκφράσουν αποτελεσματικά την πρωτεΐνη-στόχο.
Παρασκευάζονται δείγματα LNP-eGFP circRNA και οι διαφορετικές δόσεις τους (1 μg, 2 ug και 4 ug) διαμολύνονται απευθείας σε κύτταρα 293Τ για να επαληθευτεί εάν μπορούν να εκφράσουν την πρωτεΐνη-στόχο. Μετά από 48 ώρες επιμόλυνσης, μπορεί να παρατηρηθεί ένα καθαρό φθορίζον σήμα και υπάρχει μια επίδραση κλιμάκωσης δόσης της έντασης φθορισμού.
Το Lipo-circ_eGFP, που αποτελείται από λιπόσωμα και μη ενθυλακωμένο eGFP circRNA λαμβάνεται ως έλεγχος.