Η Σημασία της Ανάπτυξης Προϋπολογισμικού Προϊόντος
Ο προϋπολογισμικός διαδικαστικός κύκλος (USP), επίσης γνωστός ως διαδικασία φθοράς, είναι μια από τις αρχικές φάσεις της προϋπολογισμικής βιοεπεξεργασίας. Η διαδικασία φθοράς μικροβιών είναι κρίσιμη για την υψηλή πυκνότητα κυτταρικής κουλτούρας και την έκφραση εξωτερικού γονιδίου, η οποία επηρεάζει άμεσα την απόδοση και το κόστος των βιολογικών προϊόντων.
Στα πρώιμα στάδια της ανάπτυξης βιολογικών προϊόντων (προ-κλινικά ή φάση 1/2), το κεντρικό σημείο είναι να αναπτυχθούν μεγεθοσκοπικές διαδικασίες χωρίς το χρήσιμο των ζώων με μεσαία απόδοση και να πληρούν όλα τα πρότυπα ποιότητας του προϊόντος.
Όταν βρισκόμαστε στα τελικά στάδια (φάση 3 ή εμπορική), θα επικεντρωθούμε στην απόδοση, την αξιοπιστία, την κλιμάκωση και την αναπαραγωγικότητα, δημιουργώντας μια διαδικασία με χαμηλό κόστος. Οι δραστηριότητες που αντιμετωπίζουν αυτά τα ζητήματα είναι οι μελέτες χαρακτηρισμού και επιβεβαίωσης της διαδικασίας. Εν τω μεταξύ, τα εργαλεία ποιότητα από την σχεδιασμό (QbD) και σχεδιασμός πειραμάτων (DoE) εφαρμόζονται συνήθως.
Λέξεις-κλειδιά: ανάπτυξη, βελτιστοποίηση και επιβεβαίωση διαδικασίας, διαδικασία φερμεντασιόνων, φερμεντασιόνων μικροβιακών κυττάρων, φερμεντασιόνων βακτηριών, φερμεντασιόνων μάγειρας, φερμεντασιόνων υψηλής πυκνότητας, φερμεντασιόνων μεγαλύτερων γονιμοποιημένων στρατηγικών
Εφαρμογή: βιοφαρμακευτική βιομηχανία, ανθρώπινη ιατρική, ιατρική ζώων, εμβόλια, αναδιπλασιαστικά μεγάλα μοριακά βιολογικά, αναδιπλασιαστικά βιολογικά, βιολογικός ρεαγματοφόρος
Λύσεις USP της Yaohai Bio-Pharma
Ευνοώντας από περισσότερα από 10 χρόνια εμπειρίας στις μικροβιακές φερμεντασιόνες, η Yaohai Bio-Pharma έχει τη γνώση να βοηθήσει να λύσει προκλήσεις της διαδικασίας φερμεντασιόνων. Μπορούμε να θεσπίσουμε γρήγορα στρατηγικές υψηλής πυκνότητας φερμεντασιόνων για Escherichia coli (E. coli) εκτός περιπλασματική κατάθεση, ενδοκυτταρική διάλυση ή έκφραση σώματος περίληψης, και μερική ή ενδοκυτταρική έκφραση με ζύμη.
Οι διαθέσιμες γενικές υπηρεσίες ανάπτυξης φθοράς περιλαμβάνουν:
- Σχεδιασμός διαδικασίας φθοράς που εκτελείται σε μικρή κλίμακα 7L σε λειτουργικό τρόπο fed-batch
- Έλεγχος ισχύος τριών βαθμών σε φθορείς 7L
- Μεσαία κλίμακα διαδικασίας σε 30L/70L
Μπορούμε να εκτελέσουμε πολυπαραμετρική βελτιστοποίηση με ευελιξία για να επιτύχουμε την επιθυμητή απόδοση ή αναλογία, χρησιμοποιώντας τον τρόπο One-Time-A-Factor (OTAF) ή Design-of-experiments (DoE).
Κλειδιαίοι παράμετροι φθοράς αναφέρονται ως εξής:
Συνθέσεις μέσων φθοράς χωρίς ζώα
Χωρίς αντιβιοτικά ή όχι, Τόμος εισαγωγής
Θερμοκρασία αύξησης, pH, Επίπεδο διαλυμένου οξυγόνου (DO)
Τροφικό τρόπος (π.χ., κατά μικρά ποσά)
Συγκέντρωση ενδυτή (π.χ., IPTG, μεθανόλη), Σημείο ενδυτικής (βάρος υγρών κυττάρων/OD600),
Θερμοκρασία ενδυτικής, Χρόνος ενδυτικής
κ.λπ.
Λεπτομέρειες Υπηρεσίας
| Υπηρεσίες |
Ροή διαδικασίας |
| Ανάπτυξη σε Φλάσκο Σεισμού (500 mL) |
Παρασκευή μέσων χωρίς ζώα → Ανάπτυξη μικροβιακού σπόρου → Ανάπτυξη σε σειστή → Ενδυτική → Συλλογή |
| Ανάπτυξη σε Φερμεντήρα (7 L) |
Παρασκευή μέσων χωρίς ζώα → Ανάπτυξη μικροβιακού σπόρου → Υψηλή πυκνότητα φυτών κυττάρων σε βιορεάκτορα 7L → Ενδυτική → Συλλογή |
| Έλεγχος Ποιότητας Πρωτεϊνών/Πεπτίδων |
Προεπεξεργασία Εσωτερικής ενδιάμεσης έκφρασης: Συλλογή και ανασuspension μικροβιακών κυττάρων → Υπερηχική σπάση → Απόβλεψη κυτταρικών πεπτικών λειού → Πρώτη εκτροφή Έκφραση περιεκτικού σώματος: Συλλογή και ανασuspension μικροβιακών κυττάρων → Υπερηχική σπάση → Παρασκευή περιεκτικού σώματος → Πρώτη εκτροφή Εξωτερικής ενδιάμεσης έκφρασης: Συλλογή υπερηχικού περιστρώματος → Συγκέντρωση και αντιμεταθέση βουνάτου → Πρώτη εκτροφή Ανάλυση ποιότητας Πρώτη εκτροφή ως δείγμα → Ανάλυση στόχιου πρωτεΐνης με SDS PAGE ή Western blotting (WB) |
| Έλεγχος ποιότητας πλάσμιδων |
Προεπεξεργασία και Ανάλυση Ποιότητας Εξαγωγή πλάσμιδων → Ανάλυση DNA με ηλεκτροφόρηση σε αγγελιά γελατινών |
Μελέτη περιπτώσεων
Αναλαμβάνουμε από τον πελάτη μας να αυξήσουμε την απόδοση στόχιου πολυπεπτιδικού ormονού από 8 g/L σε 10 g/L.
Με βάση το Σχεδιασμό Πλήρους Παραγοντικού και το Σχεδιασμό Επιφάνειας Απόκρισης στα εργαλεία DoE, αναγνώρισαν και πτυχέυσαν γρήγορα τις κλειδιαίες παραμέτρους φθοράς. Υπό την βελτιωμένη διαδικασία φθοράς με υψηλή πυκνότητα κυττάρων, το επίπεδο εκφώνησης αυξήθηκε σε 10 g/L.
Οι εμπειρίες μας
- Έχουμε εργαστεί με διάφορους τύπους μικροβιακών φιλοξενιών, για παράδειγμα, E.Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) και Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Έχουμε εμπειρία σε E. coli εκτός κυττάρων εκκρίνηση, λύσιμη και εκκρινόμενη έκφραση σώματος περιλήψεως, καθώς και εσωτερική ή εξωτερική εκφώνηση με χρήση μάνης. Το απόδοσμα του σώματος περιλήψεως φτάνει έως και 10g/L, ενώ το απόδοσμα λύσιμου πρωτεΐνου εκτεινόταν από 0.5 έως 15g/L.
- Έχουμε εμπλακεί στην ανάπτυξη και την παραγωγή διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων ανασυνδυασμένων εμβολίων υπομονάδας, παρόμοιων σωματιδίων (VLPs), ormονών (insulin, GLP-1, ανθρωπίνη ανάπτυξη ormονή), κυτταρικά κύτταρα (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), παράγοντες ανάπτυξης (EGF, FGF, NGF), nanobodies/ μονοδομενικά αντισώματα (sdAbs), ένζυμα, κλπ.
- Εξοπλισμός
7L*16 Σύστημα Φθοράς
Αναλυτικός Cedex Bio, Βιοπροϊόν αναλυτικό
EL
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
