Προσδιορισμός μοριακού βάρους με LC-MS
Το άθικτο μοριακό βάρος αναγνωρίζεται πάντα ως σημαντικό χαρακτηριστικό των βιολογικών. Η ανάλυση ακέραιου μοριακού βάρους χρησιμοποιείται για την επίδειξη των προϊόντων πρωτεΐνης/πεπτιδίου και την επαλήθευση των βιολογικών. Η μέτρηση του μοριακού βάρους είναι απαίτηση των ρυθμιστικών κατευθυντήριων γραμμών.
Η Yaohai Bio-Pharma προσφέρει άθικτη ανάλυση μοριακού βάρους υπό φυσικές, μειωμένες, Ν-απογλυκοζυλιωμένες συνθήκες. Χρησιμοποιούμε Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS) για να προσδιορίσουμε το άθικτο μοριακό βάρος.
Ρυθμιστικές απαιτήσεις για το μοριακό βάρος
Συνιστάται στο ICH Q6 ότι «το μοριακό βάρος (ή το μέγεθος) προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους, ηλεκτροφόρηση γέλης SDS-πολυακρυλαμιδίου (υπό αναγωγικές και μη αναγωγικές συνθήκες), φασματομετρία μάζας (MS) και άλλες κατάλληλες τεχνικές».
Αναλυτικές μέθοδοι
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Μοριακό βάρος |
LC-MS / Υγρή Χρωματογραφία/ Φασματομετρία Μάζας Ηλεκτροψεκασμού (LC/ES-MS) φυσικών, ανηγμένων, Ν-απογλυκοσυλιωμένων πρωτεϊνών ή υπομονάδας |
Αναλυτικές Διαδικασίες
Άθικτο μοριακό βάρος:
- Εκτέλεση LC-MS στο εγγενές δείγμα όπως ελήφθη.
- Ανάλυση δεδομένων LC-MS.
Μειωμένο μοριακό βάρος:
- Επεξεργασία του δείγματος πρωτεΐνης με κατάλληλο αναγωγικό παράγοντα.
- Εκτέλεση LC-MS στην ανηγμένη πρωτεΐνη.
- Ανάλυση δεδομένων LC-MS.
Ν-απογλυκοζυλιωμένο μοριακό βάρος:
- Αφαίρεση των Ν-γλυκανών με κατάλληλο ένζυμο.
- Εκτέλεση LC-MS στην Ν-απογλυκοσυλιωμένη πρωτεΐνη.
- Ανάλυση δεδομένων LC-MS.
Μειωμένο και Ν-απογλυκοζυλιωμένο μοριακό βάρος:
- Επεξεργασία του δείγματος πρωτεΐνης με κατάλληλο αναγωγικό παράγοντα.
- Αφαίρεση των Ν-γλυκανών με κατάλληλο ένζυμο.
- Εκτέλεση LC-MS σε ανηγμένη και Ν-απογλυκοσυλιωμένη πρωτεΐνη.
- Ανάλυση δεδομένων LC-MS.
Μοριακό βάρος υπομονάδας πρωτεΐνης:
- Διάσπαση υπομονάδας
- Εκτέλεση LC-MS σε υπομονάδα πρωτεΐνης
- Ανάλυση Δεδομένων LC-MS
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
