Η απασφάλιση του τόπου N-γλυκοσυλούστεωσης είναι μια φυσιολογική προσδιοριστική χαρακτηριστική των γλυκοπρωτεϊνών και παράγει κυρίως N-γλυκάν. Η υπηρεσία ανάλυσης απασφάλισης του τόπου N-γλυκοσυλούστεωσης της Yaohai Bio-Pharma εκτελείται μέσω περιστομιασμού, απελευθέρωσης, ενίσχυσης και ανάλυσης με χρωματογραφία ροής-ιονισμός με ηλεκτροσπράγγιση-διαδοχική μαζική ανάλυση (LC-ESI-MS/MS).
Έχουμε εμπλοκή στην Χαρακτηριστική Αναγνώριση Πρωτεΐνης για διάφορα μεγάλα μόρια, συμπεριλαμβανομένων των Αναδιπλασιασμένων Ενόπλων Εμβολίων, Nanobodies/VHHs/ Μονοδομενικών Αντισώματα (sdAbs), Τμήματα Αντισώματος, Ορμόνων/Πεπτιδίων, Κυτοκινών, Γονιμοποιητικών Παραγόντων (GF), Ενζυμάτων, Κολλαγενίων, κλπ.
Κανονιστικές απαιτήσεις για την απασφάλιση του τόπου N-γλυκοσυλούστεωσης
Σύμφωνα με την κατεύθυνση ICH Q6B, «για τα γλυκοπρωτεΐνες, ορίζεται η περιεχόμενος ζάχαρης (ουδέτερες ζάχαρες, αμινοζάχαρες και σιαλικές ξενικές). Επιπλέον, αναλύεται η δομή των αλυσίδων ζάχαρης, το μοτίβο των ολιγοζαχαριδίων (προφίλ αντενών) και τα τοποθέτησης γλυκοσυλοποίησης της πολυπεπτιδικής αλυσίδας όσο το δυνατόν περισσότερο.»
Αναλυτική Μέθοδος
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Απασχόληση Τόπου N-γλυκοσύλησης |
LC-MS μετά από πεψίδα δεγλυκοσιδάσης και πρωτεάσης |
Διαδικασίες
1. Πεψίδα πρωτεΐνης για να δημιουργηθούν μικρά κομμάτια πεπτίδων.
2. Απελευθέρωση N-γλυκάνων με τη χρήση endoglycosidase H ή PNGase F. Η Endoglycosidase H κόβει την ένδυση μεταξύ των δύο GlcNAc υποδομών στον πυρήνα των N-συνδεδεμένων γλυκάνων, ενώ η PNGase F είναι μια γλυκοαμιδάση που κόβει την ένδυση μεταξύ του GlcNAc και του Asn, απελευθερώνοντας ολόκληρη την ζαχαροποιημένη αλυσίδα και μετατρέποντας τον Asn σε Asp με αύξηση μάζας κατά 1-Da.
3. Ενισχύσεις N-γλυκοπεπτίδων μέσω HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Ανάλυση της καταχώρησης των τοποθεσιών N-συνδεδεμένης γλυκοσυλοποίησης με LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
