Το προφίλ των Ν-γλυκανών είναι απαραίτητο για την παραγωγή βιοφαρμακευτικών προϊόντων. Η Yaohai Bio-Pharma παρέχει υπηρεσία διαμόρφωσης προφίλ Ν-γλυκάνης χρησιμοποιώντας Υγρή Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας (LC-MS) απελευθερωμένων και επισημασμένων γλυκανών. Τα γενικά βήματα για την παρασκευή δείγματος Ν-γλυκανών περιλαμβάνουν την πέψη της γλυκοπρωτεΐνης (GP), την απογλυκοζυλίωση, τον καθαρισμό, την επισήμανση/παραγωγοποίηση και την Εκχύλιση Στερεάς Φάσης (SPE).
Έχουμε συμμετάσχει στον δομικό χαρακτηρισμό πρωτεϊνών διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων ανασυνδυασμένης υπομονάδας, των νανοσωμάτων/VHHs/ αντισωμάτων ενός τομέα (sdAbs), θραυσμάτων αντισωμάτων, ορμονών/πεπτιδίων, κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων (GF), ενζύμων, και τα λοιπά.
Κανονιστικές Απαιτήσεις για Προφίλ N-Γλυκάνης
Σύμφωνα με την οδηγία ICH Q6B, «για τις γλυκοπρωτεΐνες, προσδιορίζεται η περιεκτικότητα σε υδατάνθρακες (ουδέτερα σάκχαρα, αμινοζάχαρα και σιαλικά οξέα). Επιπροσθέτως, η δομή των αλυσίδων υδατάνθρακα, το μοτίβο ολιγοσακχαρίτη (το προφίλ κεραίας) και οι θέσεις γλυκοζυλίωσης της πολυπεπτιδικής αλυσίδας αναλύονται στο μέτρο του δυνατού.
Αναλυτική Μέθοδος
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Προφίλ Ν-γλυκάνης |
Ανάλυση υγρής χρωματογραφίας-φασματομετρίας μάζας (LC-MS) απελευθερωμένων και επισημασμένων γλυκανών |
Διαδικασίες
1. Ενζυματική απελευθέρωση γλυκάνης με πεπτίδιο N-γλυκοσιδάση F (PNGase F)
2. Παραγωγοποίηση απελευθερωμένων γλυκανών από 2-αμινοβενζαμίδιο (2-AB)
3. Καθαρισμός των συλλεγόμενων Ν-γλυκανών σε στήλη TSK Amide - 80 εάν υπάρχουν μεγάλες ποσότητες απορρυπαντικών, μη πτητικά άλατα ή υλικά με ελεύθερες αμινομάδες
4. Επισήμανση με φθορίζον 2-αμινοβενζαμίδιο (2-AB)
5. Ανάλυση LC-MS επισημασμένων Ν-γλυκανών
6. Ανάλυση δεδομένων
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
