Οι δεδομένοι χάρτη πεπτιδίων με βάση την Υγρή Χρωματογράφηση - Μαζική Φασματοσκοπία (LC-MS) θα παρέχουν μεγάλο ποσό πληροφοριών για την αρχική και υψηλότερη δομή φυσικών και αναδιπλασιασμένων πρωτεΐνων, συμπεριλαμβανομένων της κάλυψης αλληλεπιδράσεων αμινοξέων, των μεταγενεσιακών τροποποιήσεων (PTMs, π.χ., γλυκοσύληση, οξείδωση, δεαμιδάσεις), δεσμών δισθιονικών, κλπ.
Το Yaohai Bio-Pharma προσφέρει υπηρεσίες ανάλυσης χάρτη πεπτιδίων για την στόχο πρωτεΐνη σας με LC-MS, για να επιταχύνει την έρευνά σας σχετικά με την δομή πρωτεΐνης.
Έχουμε εμπλοκή στην Χαρακτηριστική Αναγνώριση Πρωτεΐνης για διάφορα μεγάλα μόρια, συμπεριλαμβανομένων των Αναδιπλασιασμένων Ενόπλων Εμβολίων, Nanobodies/VHHs/ Μονοδομενικών Αντισώματα (sdAbs), Τμήματα Αντισώματος, Ορμόνων/Πεπτιδίων, Κυτοκινών, Γονιμοποιητικών Παραγόντων (GF), Ενζυμάτων, Κολλαγενίων, κλπ.
Κανονιστικές Απαιτήσεις για Χάρτη Πεπτιδίων
Οδηγία ICHQ6B προτείνει: «Η επιλεκτική κατάσπαση του προϊόντος σε απομονωμένα πεπτίδια εκτελείται με τη χρήση επιτυχών ένζυμων ή χημικών ουσιών και τα προκύψαντα πεπτίδια αναλύονται με HPLC ή άλλη κατάλληλη αναλυτική διαδικασία. Τα πεπτίδια θα πρέπει να αναγνωριστούν όσο γίνεται περισσότερο με τεχνικές όπως η ανάλυση σύνθεσης αμινοξέων, η αλληλουσιώδης ακολουθία ή μαζική φάση (MS). Η χάρτης πεπτιδίων της ενεργού ουσίας ή του φαρμακευτικού προϊόντος (DP) με μια κατάλληλα επιβεβαιωμένη μέθοδο είναι μια συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος για επιβεβαίωση της επιθυμητής δομής του προϊόντος για την έκδοση των παραγωγικών σειρών.»
Αναλυτικές Μεθόδοι
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Χάρτισμα Πεπτίδων |
Πρωτεολυτική Κατάσπαση και Υγρή Χρωματογράφηση-Μαζική Φάση (LC-MS) |
Αναλυτική Διαδικασία
1. Ανακατάσταση και Αλκυλοποίηση
Ο σκοπός είναι να μειώσουμε τα δεξαμενικά γέφυρα και να εμποδίσουμε τα παραγόμενα ελεύθερα θιόλ. Η μείωση των δεξαμεινικών γεφυρών βοηθεί να ανοίξει η δομή του πρωτεΐνου, κάνοντας την πρωτεολυτική πεψή πιο αποτελεσματική. Αυτή η φάση θα διακόψει επίσης τις γέφυρες μεταξύ των αλυσίδων στην περίπτωση πολυαλυσιδών πρωτεϊνών που έχουν δεξαμεινικά γέφυρα που συνδέουν τις αλυσίδες (π.χ. μονοκλωνικά αντισώματα, mAbs).
2. Πεψή του πρωτεΐνου χρησιμοποιώντας ζυμοτρόπους
Ο σκοπός είναι να διασπάσουμε το πρωτεΐνο σε πεπτίδια. Επιλέξαμε τους ζυμοτρόπους με βάση τη θεωρητική ακολουθία του πρωτεΐνου και τη γνώση της θεωρητικής πεψής του πρωτεΐνου από ζυμοτρόπους. Η επιλογή των ζυμοτρόπων με αυτόν τον τρόπο θα πρέπει να οδηγήσει στην καλύτερη ανάλυση χαρτογράφησης πεπτιδίων.
3. Ανάλυση των πεπτιδιούσων μετά την πεψή Χρησιμοποιώντας On-line Reverse Phase-Υψηλής Απόδοσης Υγρή Χρωματογράφηση με Ακτινοβολική (UV) και Ανίχνευση Μαζικού Φασματοσκοπιού με Ηλεκτρορρόφη (LC/ES-MS).
Διαχωρισμός πεπτιδίων με βάση την πολαρότητα χρησιμοποιώντας LC (reverse phase-LC)
Όπως το πεπτίδιο εκροεί από την στήλη LC, το μαζοσπεκτρομέτρο θα δημιουργήσει πληροφορίες μάζας μαζί με πληροφορίες κατά κλάσματα ιόντων, που μας επιτρέπουν να καθορίσουμε τις πληροφορίες ακολουθίας. Χρησιμοποιούμε τις πληροφορίες ακολουθίας για να επιβεβαιώσουμε τοτοσσοτικό της ταυτότητα του πεπτιδίου και να παρέχουμε πρωταρχικές πληροφορίες.
Μπορούμε επίσης να δημιουργήσουμε πληροφορίες κατά κλάσματα από τα πεπτίδια όπως εισέρχονται στην πηγή μαζοσπεκτρομέτρου από την στήλη LC. Ανάλογα με τις απαιτήσεις της μελέτης, αυτό είναι είτε επιλεκτικό LC-MS/MS ή μη επιλεκτικό, που μπορεί να θεωρηθεί ως μια μορφή τανδεμ MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
