Δεδομένα χαρτογράφησης πεπτιδίων που βασίζονται σε υγρή χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας (LC-MS) θα παρέχουν μεγάλη ποσότητα πληροφοριών για την πρωτογενή και υψηλότερης τάξης δομή φυσικών και ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένης της κάλυψης αλληλουχίας αμινοξέων, μετα-μεταφραστικών τροποποιήσεων (PTMs, π.χ. γλυκοζυλίωση , οξείδωση, αποαμίδωση), δισουλφιδικοί δεσμοί κ.λπ.
Η Yaohai Bio-Pharma προσφέρει υπηρεσίες ανάλυσης χαρτογράφησης πεπτιδίων για την πρωτεΐνη-στόχο σας μέσω LC-MS, για να επιταχύνει την έρευνά σας σχετικά με τη δομή της πρωτεΐνης.
Έχουμε συμμετάσχει στον δομικό χαρακτηρισμό πρωτεϊνών διαφόρων μεγάλων μορίων, συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων ανασυνδυασμένης υπομονάδας, των νανοσωμάτων/VHHs/ αντισωμάτων ενός τομέα (sdAbs), θραυσμάτων αντισωμάτων, ορμονών/πεπτιδίων, κυτοκινών, αυξητικών παραγόντων (GF), ενζύμων, και τα λοιπά.
Ρυθμιστικές απαιτήσεις για χαρτογράφηση πεπτιδίων
Η κατευθυντήρια γραμμή ICHQ6B συνιστά, «Ο εκλεκτικός κατακερματισμός του προϊόντος σε διακριτά πεπτίδια πραγματοποιείται με τη χρήση κατάλληλων ενζύμων ή χημικών ουσιών και τα προκύπτοντα πεπτιδικά θραύσματα αναλύονται με HPLC ή άλλη κατάλληλη αναλυτική διαδικασία. Τα πεπτιδικά θραύσματα θα πρέπει να ταυτοποιούνται όσο το δυνατόν περισσότερο με τη χρήση τεχνικών όπως η ανάλυση σύνθεσης αμινοξέων, ο προσδιορισμός της Ν-τερματικής αλληλουχίας ή η φασματομετρία μάζας (MS). Η χαρτογράφηση πεπτιδίων της δραστικής ουσίας ή του φαρμακευτικού προϊόντος (DP) χρησιμοποιώντας μια κατάλληλα επικυρωμένη μέθοδο είναι μια μέθοδος που χρησιμοποιείται συχνά για την επιβεβαίωση της επιθυμητής δομής του προϊόντος για απελευθέρωση παρτίδας.»
Αναλυτικές μέθοδοι
| Ανάλυση |
Μέθοδοι |
| Χαρτογράφηση πεπτιδίων |
Πέψη πρωτεάσης και υγρή χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας (LC-MS) |
Αναλυτική διαδικασία
1. Αναγωγή και Αλκυλίωση
Ο σκοπός είναι να μειωθούν οι δισουλφιδικές γέφυρες και να αποκλειστεί η παραγόμενη ελεύθερη θειόλη. Η μείωση των δισουλφιδικών γεφυρών βοηθά στο άνοιγμα της δομής της πρωτεΐνης που καθιστά την πρωτεολυτική πέψη πιο αποτελεσματική. Αυτό το βήμα θα σπάσει επίσης τις γέφυρες μεταξύ των αλυσίδων στην περίπτωση πρωτεϊνών πολλαπλών αλυσίδων που έχουν δισουλφιδικές γέφυρες που συνδέουν τις αλυσίδες (π.χ. μονοκλωνικά αντισώματα, mAbs).
2. Πέψη της πρωτεΐνης με χρήση ενζύμων
Ο σκοπός είναι η διάσπαση της πρωτεΐνης σε πεπτίδια. Επιλέξαμε τα ένζυμα με βάση τη θεωρητική αλληλουχία της πρωτεΐνης και τη γνώση της θεωρητικής πέψης της πρωτεΐνης από τα ένζυμα. Η επιλογή ενζύμων με αυτόν τον τρόπο, θα πρέπει να οδηγήσει στην καλύτερη ανάλυση χαρτογράφησης πεπτιδίων.
3. Analysis of The Digested Peptides Χρήση on-line υγρής χρωματογραφίας αντίστροφης φάσης υψηλής απόδοσης με υπεριώδη ακτινοβολία (UV) και φασματομετρική ανίχνευση μάζας με ηλεκτροψεκασμό (LC/ES-MS).
Διαχωρισμός πεπτιδίων με βάση την πολικότητα χρησιμοποιώντας LC (αντίστροφη φάση-LC)
Καθώς το πεπτίδιο εκλούεται από τη στήλη LC, το φασματόμετρο μάζας θα δημιουργήσει πληροφορίες μάζας μαζί με πληροφορίες ιόντων θραύσματος, οι οποίες μας επιτρέπουν να προσδιορίσουμε τις πληροφορίες αλληλουχίας. Χρησιμοποιούμε τις πληροφορίες αλληλουχίας για να επιβεβαιώσουμε την ταυτότητα πεπτιδίου και να παρέχουμε πρωτογενείς πληροφορίες.
Μπορούμε επίσης να δημιουργήσουμε τις πληροφορίες κατακερματισμού από τα πεπτίδια καθώς εισέρχονται στην πηγή του φασματόμετρου μάζας από τη στήλη LC. Ανάλογα με τις απαιτήσεις της μελέτης, αυτό είναι είτε επιλεκτικό LC-MS/MS είτε μη επιλεκτικό, το οποίο μπορεί να θεωρηθεί ως μια μορφή διαδοχικής MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
