Σε σύγκριση με την ενζυματική κάλυψη δύο σταδίων, η μέθοδος συν-μεταγραφικής κάλυψης ενός βήματος μπορεί να μειώσει σημαντικά τη ροή της διαδικασίας. Η μέθοδος είναι προσανατολισμένη στα αποτελέσματα και περιλαμβάνει την προσθήκη αναλόγων καλύμματος στην αντίδραση μεταγραφής in vitro (IVT). Ανάλογα καλύμματος μπορούν να εισαχθούν στην αρχή της μεταγραφής και mRNA με δομή καπακιού μπορεί να ληφθεί μετά την ολοκλήρωση της μεταγραφής. Τα τρέχοντα ανάλογα καπακιού τρίτης γενιάς μπορούν να αποφύγουν την αντίστροφη κάλυψη και να προσθέσουν απευθείας τη δομή Cap 1 στο προϊόν μεταγραφής.
Για τις εκτιμήσεις της in vivo ανοσογονικότητας και της αποτελεσματικότητας μετάφρασης του mRNA, η διαδικασία IVT συχνά υιοθετεί ορισμένα είδη τροποποιημένων NTP και κοινά τροποποιημένα νουκλεοτίδια είναι η ψευδουριδίνη (Ψ), η N1-μεθυλ-ψευδουρι-δίνη (N1Ψ) και η 5-μεθυλκυτοσίνη (5 mC) .
Σχήμα: Διάγραμμα της αντίδρασης συν-μεταγραφής και κάλυψης mRNA
Λεπτομέρειες υπηρεσιών
Υπηρεσία |
Λεπτομέρειες υπηρεσιών |
Περίοδος παράδοσης (Εργάσιμη ημέρα) |
Συν-μεταγραφικό όριο |
Μεταγραφική απόκριση in vitro (ανάλογο Clean Cap) |
1-2 |
| Τροποποιήσεις νουκλεοτιδίων (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Αφαίρεση προτύπου DNA (DNase I) |
Βελτιστοποίηση συνθηκών IVT - προαιρετικό |
Σχεδιασμός και βελτιστοποίηση στοιχείων αντίδρασης |
3-7 |
Τα χαρακτηριστικά μας
- Διαφοροποιημένες στρατηγικές τροποποίησης νουκλεοτιδίων
Πολλαπλές προαιρετικές στρατηγικές τροποποίησης νουκλεοτιδίων μπορούν να βελτιώσουν την έκφραση πρωτεΐνης.
- Βελτιστοποιημένο Σύστημα Αντίδρασης
Επιτύχετε υψηλή αναλογία μεταγραφής και υψηλή απόδοση κάλυψης.
- Διαδικασία σταθερής κάλυψης
Επίτευξη ποσοστού ανώτατου ορίου άνω του 95%.
Αποτρέψτε την αποικοδόμηση του mRNA αποτελεσματικά ελέγχοντας αυστηρά την RNase στο πειραματικό περιβάλλον και τα αναλώσιμα.
Μελέτη περίπτωσης
Η Yaohai Bio-Pharma έχει δημιουργήσει μια ώριμη πλατφόρμα διαδικασίας συν-μεταγραφικής κάλυψης, χρησιμοποιώντας ανάλογα καθαρά καπάκια για την άμεση προσθήκη της δομής Cap1 αποφεύγοντας την αντίστροφη κάλυψη. Μετά από τυποποιημένη προεπεξεργασία δείγματος και ανίχνευση τριχοειδούς ηλεκτροφόρησης (CE), ο ρυθμός κάλυψης του mRNA ενισχυμένης πράσινης φθορίζουσας πρωτεΐνης (eGFP) μπορεί να φτάσει περισσότερο από 95%.
Αποδοτικότητα κάλυψης mRNA eGFP άνω του 95%
Το mRNA eGFP και mRNA του mCherry που παρασκευάζονται με συν-μεταγραφική κάλυψη διαμολύνονται σε κύτταρα 293Τ, αντίστοιχα, και ένα ισχυρό φθορίζον σήμα παρατηρείται μετά από 48 ώρες, υποδηλώνοντας ότι το mRNA εκφράζεται αποτελεσματικά σε κύτταρα 293Τ.
Έκφραση mRNA eGFP και mRNA mCherry σε 293Τ Κύτταρο
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
ΟΧΙ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
