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Tag-freie Proteinpräparationsdienste

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Tag-freie Proteinpräparationsdienste

Protein-Tags, die als Fusionspartner in rekombinanten DNA-Technologien verwendet werden, ermöglichen eine effektive Affinitätsreinigung in einem Schritt für verschiedene Proteine/Peptide mit unterschiedlichen Eigenschaften. Trotz dieses wichtigen Vorteils können Tags als exogene Aminosäuren die Proteinstruktur und biologischen Funktionen verändern. Aus Sicherheits- und Wirksamkeitsgründen sind daher nicht-markierte (tag-freie) Proteine ​​oder Peptide vorzuziehen, insbesondere im biopharmazeutischen Bereich. Für ein rekombinantes Protein mit einem Fusions-Tag gibt es nur begrenzte Möglichkeiten, eine Zulassung von medizinischen/medikamentösen Behörden zu erhalten.

Basierend auf der F&E-Plattform für mikrobielle Biologika bietet Yaohai Bio-Pharma maßgeschneiderte, nicht markierte (tag-freie) Proteinpräparationsdienste an, die auf die Erfüllung einzigartiger Ziele für Forschung, Entwicklung und Herstellung für den klinischen Einsatz ausgerichtet sind.

Schlüsselwörter: tagfreie Proteinproduktion, Reinigung nicht-markierter Proteine, freie tagbasierte Proteinpräparation, taglose Proteinexpression und -reinigung, hochgradig tagfreies Zielprotein. Anwendung: Humanmedizinische Forschung, Entwicklung von Tierarzneimitteln, Entwicklung rekombinanter Impfstoffe, Produktion rekombinanter Biologika mit großen Molekülen.


Unsere mikrobielle F&E-Plattform

Wir verfügen über Erfahrung in der mikrobiellen Stammentwicklung, Fermentation und Produktreinigung.

Bakterien: Escherichia coli (E. coli)

Hefe: Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha)

Benutzerdefinierte Optionen

Modalität Rekombinantes Protein
Ausgangsmaterialien Gensequenzen, rekombinante Plasmide oder gentechnisch veränderte Stämme
Leistungen Reinheit: >80 %, >85 %, >90 % Menge: 0.2–10 g (wird vom Projekt bestimmt)
Expressionssystem und Bildung E. coli periplasmatische Sekretion, lösliche und Einschlusskörperexpression; Hefe intrazelluläre oder sekretorische Expression
Analysemethoden Ultraviolett (UV), Bicinchoninsäure-Assay (BCA), Bradford oder Lowry für die Menge. Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) für Reinigungstests. Optional: Western Blot (WB), Enzymimmunoassay (ELISA), Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC).
Restverunreinigungen Endotoxin (optional)

Details zu den Dienstleistungen

Leistungen Service Details Minimaler Zeitrahmen (Arbeitstag)
Gensynthese Codon-Optimierung für spezifischen Expressionswirt 7 ~ 10 Tag
Gensynthese
Plasmid-/Vektorkonstruktion Klonen in Plasmid/Vektor 2 Tage
Plasmidtransformation
Verifizierung durch Polymerase-Kettenreaktion (PCR), Restriktionsenzymverdau, Gensequenzierung 3 Tage
Proteinexpression in E. coli Plasmidtransformation, 2 Tage
Kultivierung im Schüttelkolben 3 Tage
7L-Sackgärung, Optimierung 4 Tage/Charge
Tag-freie Proteinreinigung, Optimierung 5 ~ 10 Tage / Charge
Prüfung mittels Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE)
Proteinexpression in Hefe Vorbereitung kompetenter Hefezellen 4 Tage
Plasmidlinearisierung und Elektrotransformation
7L-Sackgärung, Optimierung 5 Tage
Tag-freie Proteinreinigung, Optimierung 7 Tage/Charge
Tag-freie Proteinreinigung 5 ~ 10 Tage / Charge
Qualitätskontrolle durch SDS-PAGE

Zusätzliche Dienstleistungen (optional)

Entwicklung von Fermentationsprozessen

Entwicklung eines tagfreien Proteinreinigungsprozesses

Pilotmaßstab und GMP-Herstellung

Analyse und Prüfung

Unsere Eigenschaften

Wir haben an mehr als 300 gentechnisch veränderten mikrobiellen Stämmen gearbeitet, darunter E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115; PichiaPink Stamm 1/2/3/4; und H. polymorpha.

Wir haben Erfahrung mit der periplasmatischen Sekretion von E. coli, der Expression löslicher und Einschlusskörperchen sowie der intrazellulären oder sekretorischen Expression von Hefe.

Wir etablieren eine Hochdurchsatz-Screening-Plattform, um aus über einhundert Kandidatenstämmen ertragreiche und stabile Stämme auszuwählen.

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