การควบคุมคุณภาพและการประยุกต์ใช้โปรตีน рекомбинант

การควบคุมคุณภาพของโปรตีน рекомbinant มีความสำคัญต่อความน่าเชื่อถือและความสามารถในการทำซ้ำของข้อมูลทดลอง ทุกขั้นตอนตั้งแต่การออกแบบโครงการจนถึงกระบวนการผลิตจำเป็นต้องมีกลยุทธ์การควบคุมคุณภาพที่เข้มงวด

กลยุทธ์การควบคุมคุณภาพ

ภาคอุตสาหกรรมปฏิบัติตามขั้นตอนการทำงานมาตรฐานอย่างเคร่งครัด ในขณะที่ชุมชนวิชาการจำเป็นต้องเพิ่มพูนความรู้ทางวิชาชีพเพื่อปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำของข้อมูล โปรตีนที่มีการใช้งานทางชีวภาพเฉพาะหรือลักษณะทางชีวเคมีจำเป็นต้องมีกลยุทธ์การควบคุมคุณภาพ (QC) ที่ออกแบบมาโดยเฉพาะ

ตัวอย่างที่ท้าทายและวิธีแก้ปัญหา

Yaohai Bio-Pharma มีประสบการณ์มากมายในด้านการผลิตและการสกัดโปรตีน рекомbinant พร้อมทีมผู้เชี่ยวชาญ ซึ่งจะช่วยให้การผลิตโปรตีนของคุณเสร็จสมบูรณ์ด้วยความบริสุทธิ์สูง โดยอาศัยประสบการณ์จากโครงการหลายร้อยโครงการ Yaohai ขอสรุปวิธีการเพิ่มประสิทธิภาพของการสกัดโปรตีน

โปรตีนที่ผูกกับสารพันธุกรรม: ขั้นตอนการกำจัดกรดนิวคลีอิก เช่น การใช้เอนไซม์นิวคลีเอสหรือการตกตะกอนด้วย PEI เป็นสิ่งจำเป็น อัตราส่วน A260nm/A280nm จะถูกตรวจสอบเพื่อตรวจจับการปนเปื้อนของกรดนิวคลีอิก

เฟอริตินเชนหนักของหนูสำหรับ Cryo-EM: ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ต้องได้รับการปรับแต่ง และต้องเพิ่มเอนไซม์นิวคลีเอสเพื่อลดอัตราส่วน A260nm/A280nm และรับประกันความบริสุทธิ์ของโปรตีน

โปรตีนไฮบริด Human dsRBEC: กระบวนการแตกเซลล์ใช้บัฟเฟอร์ที่มียูเรีย จากนั้นทำการพับตัวบนคอลัมน์เพื่อให้ได้โปรตีนที่ทำงานได้ตามปกติ

โปรตีนที่ผูกกับแคโทนสองชนิด: ต้องเพิ่มแคโทนสองชนิดเฉพาะระหว่างการแสดงออกและการทำให้บริสุทธิ์ และควรหลีกเลี่ยงสารชีเลต

โปรตีน Iron-Sulfur: ควรหลีกเลี่ยงอิมิดาซอลเพื่อป้องกันการเสียหายของกลุ่ม [2Fe ± 2S] เพื่อรับรองการพับตัวและการทำงานของโปรตีนอย่างถูกต้อง

เศษโปรตีนละลายของ LLT1: การออกแบบมิวแทนต์ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการสร้างพันธะดิสวัลไฟด์และการพับตัวของโปรตีน ส่งผลให้เกิดโปรตีนที่เสถียรและมีผลผลิตสูง

การผลึกษา CLK1 Kinase: การสัมพันธ์ร่วมกับ λ-phosphatase ช่วยกำจัดฟอสเฟตจากไซต์การฟอสโฟรีเลชัน และใช้วิธีการโครมาโทกราฟีแยกตามขนาด (SEC) และโครมาโทกราฟีแลกเปลี่ยนประจุลบ เพื่อรับ CLK1 ที่สม่ำเสมอโดยไม่มีการฟอสโฟรีเลชันที่หลากหลาย

โปรตีนสำหรับใช้เป็นแอนติเจน: การประเมินความบริสุทธิ์เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนด้วยโปรตีนที่กระตุ้นภูมิคุ้มกันสูง สำหรับแอนติบอดี epitope โครงสร้างสามมิติของแอนติเจนจะต้องคงอยู่

โปรตีนที่มีแนวโน้มจะรวมตัวกัน: กลยุทธ์ เช่น การทดสอบเชื้อพันธุ์ต่าง ๆ และการลดอุณหภูมิการปลูกฝัง จะถูกนำมาใช้เพื่อลดปัญหาการรวมตัว และออกแบบกระบวนการปรับแต่งอย่างรวดเร็ว

การกำจัดเอนโดท็อกซิน: วิธีการ เช่น โครมาโทกราฟีประจุบวกและโครมาโทกราฟีความจุพันธะโพลีแคทไอออน ช่วยกำจัดเอนโดท็อกซิน โดยให้มั่นใจว่าระดับ LPS ต่ำกว่าขีดจำกัดของการใช้งาน

คอมเพล็กซ์โปรตีน: ยูนิตย่อยถูกแสดงผลแยกกันและนำมาประกอบใน vitro หรือร่วมแสดงผลเพื่อสร้างคอมเพล็กซ์ที่ทำงานได้ การตรวจสอบความสมบูรณ์ของคอมเพล็กซ์ทำโดยการประเมินความเป็นเนื้อเดียวกันและความหนาแน่นทางโมเลกุล

สรุป

การผลิตโปรตีนเริ่มต้นด้วยการออกแบบเชิงกลยุทธ์ โดยพิจารณาคุณสมบัติทางชีวเคมีและการใช้งาน ในระหว่างการแสดงผล การกรอง และการควบคุมคุณภาพ สภาวะและวิธีการจะถูกปรับให้เหมาะสมสำหรับเสถียรภาพ การไม่รวมตัวกัน และสถานะตามธรรมชาติ โปรตีนที่ผ่านการกรองแล้วสามารถนำไปใช้ในกระบวนการต่อไป เช่น การศึกษาคุณสมบัติทางไบโอฟิสิกส์

Yaohai Bio-Pharma กำลังมองหามาตรฐานหรือพันธมิตรรายบุคคลทั่วโลกอย่างแข็งขัน และเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากท่านมีคำถามใด ๆ กรุณาติดต่อเราได้ทุกเวลา: BD@yaohaibio.cn