การเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการกรองสำหรับอินซูลินมนุษย์เรคอมไบแนนท์

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การเพิ่มขึ้นของผู้ป่วยโรคเบาหวานได้กระตุ้นความต้องการอินซูลิน แต่อินซูลินที่ราคาเหมาะสมมีปริมาณจำกัด การผลิตอินซูลินที่มีประสิทธิภาพและประหยัดค่าใช้จ่ายเป็นสิ่งสำคัญ อินซูลินถูกผลิตขึ้นส่วนใหญ่ผ่าน Escherichia coli (E. coli) และยีสต์ เนื่องจากสามารถเติบโตอย่างรวดเร็วและมีต้นทุนต่ำ อย่างไรก็ตาม E. coli มีกระบวนการหลังการผลิตที่ซับซ้อน

ภาพรวมของการประมวลผลทางลงน้ำหนัก:

การแยกอินซูลินมนุษย์ดัดแปลงจาก inclusion bodies ของ E. coli ประกอบด้วยหลายขั้นตอน เช่น การเก็บกู้ การล้าง การละลาย และการออกซิเดชัน การตัดแบ่ง การเปลี่ยนสารละลาย การกรองด้วยโครมาโทกราฟี การตกตะกอน การทำให้กลับสู่สภาพธรรมชาติ การตัดแบ่งด้วยเอนไซม์ และการจัดรูปแบบ

Yaohai Bio-Pharma มีประสบการณ์มากมายในการผลิตและการแยกอินซูลินดัดแปลง พร้อมทั้งมีทีมผู้เชี่ยวชาญที่จะช่วยให้การผลิตอินซูลินของคุณเสร็จสิ้นด้วยประสิทธิภาพสูงสุด โดยอาศัยประสบการณ์จากโครงการหลายร้อยโครงการ Yaohai ขอสรุปวิธีการเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการแยกทางลงน้ำหนักสำหรับอินซูลินมนุษย์ดัดแปลง

การฟื้นคืนและการล้างร่างกายรวมตัว:

เซลล์ถูกทำลายด้วยวิธีทางกล (เช่น การใช้คลื่นเสียงความถี่สูง โฮโมจีไนเซอร์แรงดันสูง) หรือการบำบัดด้วยไลโซไซม์ จากนั้นล้างด้วยบัฟเฟอร์ (ที่มียูเรีย ทริตรอน X-100 ฯลฯ) เพื่อกำจัดสิ่งปนเปื้อน ในระหว่างการล้าง จำเป็นต้องปรับพารามิเตอร์เพื่อให้มั่นใจในคุณภาพของโปรตีนขณะควบคุมต้นทุน

การละลายและออกซิเดชันของร่างกายรวมตัว:

ใช้สารทำให้เสื่อมสภาพในความเข้มข้นสูง (เช่น ไกลอานีไฮโดรคลอไรด์ และยูเรีย) เพื่อละลายร่างกายรวมตัว โดยเพิ่มดิทิโอเทรออลหรือ β-เมอร์คาปโตเอทานอลเพื่อป้องกันการเกิดพันธะไดสวัลไฟด์ที่ไม่ถูกต้อง pH และอุณหภูมิมีผลอย่างมากต่อปฏิกิริยาการละลายและการออกซิเดชัน

การตัดและแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์:

การตัดด้วยไซยาโนเจนบรอมไนด์ใช้เพื่อเอาออกซิเจนที่ปลาย N ของกรดอะมิโนเริ่มต้น แต่มีปัญหาเกี่ยวกับความเป็นพิษและความจำเพาะต่ำ การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ผ่านการล้างไตแบบเยื่อหุ้ม เอ้าลตร้าฟิลเทรชัน หรือโครมาโทกราฟีแยกตามขนาด จะกำจัดสารเคมีที่เป็นอันตรายเพื่อเตรียมสำหรับขั้นตอนถัดไป

การทำให้บริสุทธิ์ด้วยโครมาโทกราฟีและการตกตะกอน:

เทคนิคโครมาโทกราฟีหลายชนิดถูกนำมาใช้ในการทำให้สารอินซูลินบริสุทธิ์ เช่น โครมาโทกราฟีแบบพันธะเฉพาะ โครมาโทกราฟีแลกเปลี่ยนประจุ โครมาโทกราฟีเฟสกลับ โครมาโทกราฟีปฏิกิริยาไฮโดรโฟบิก และโครมาโทกราฟีแยกตามขนาด วิธีการตกตะกอน เช่น การตกตะกอนด้วยค่า pH และการผลึกษาด้วยสังกะสี ถูกใช้เพื่อกำจัดสิ่งปนเปื้อนและเข้มข้นโปรตีน

การฟื้นโครงสร้างใหม่:

โปรตีนที่ละลายอยู่จะถูกเจือจางในบัฟเฟอร์ฟื้นโครงสร้าง เพื่อส่งเสริมการสร้างพันธะซัลไฟด์และพับโปรตีนอย่างถูกต้อง โครมาโทกราฟีเหลวสำหรับการพับโปรตีนและการล้างไตก็เป็นวิธีที่ใช้ในการฟื้นโครงสร้างเช่นกัน

การตัดด้วยเอนไซม์และการผสมสูตร:

ทริปซินและคาร์บอกซีเปปไทด์ B ถูกใช้เพื่อตัด C-เปปไทด์ สร้างฮีเทอรอดิเมอร์ของอินซูลินที่มีกิจกรรม จากนั้นการตกผลึกและการไลโอฟายล์จะถูกนำมาใช้เพื่อนำเอาเกลือและบัฟเฟอร์ที่เหลืออยู่ออก เพื่อเตรียมสูตรที่เสถียร โดยจะมีการเติมสารเสริมเฉพาะ (เช่น สังกะสีและโปรแทมมีน) เพื่อให้ตรงตามความต้องการทางคลินิกที่แตกต่างกัน

ข้อสรุป:

กระบวนการหลังการผลิตอินซูลินจาก E. coli มีความซับซ้อน การพัฒนาในอนาคตควรเน้นไปที่การปรับปรุงขั้นตอนเหล่านี้เพื่อการผลิตที่มีประสิทธิภาพและประหยัดต้นทุน เพื่อตอบสนองความต้องการและลดค่าใช้จ่าย

Yaohai Bio-Pharma กำลังมองหามาตรฐานหรือพันธมิตรรายบุคคลทั่วโลกอย่างแข็งขัน และเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากท่านมีคำถามใด ๆ กรุณาติดต่อเราได้ทุกเวลา: [email protected]