การเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ของอินซูลินของมนุษย์แบบรีคอมบิแนนท์

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การเติบโตของผู้ป่วยโรคเบาหวานเป็นแรงผลักดันให้ความต้องการอินซูลินเพิ่มขึ้น แต่อินซูลินราคาถูกกลับมีไม่เพียงพอ การผลิตอินซูลินที่มีประสิทธิภาพและประหยัดจึงมีความสำคัญ โดยส่วนใหญ่ผลิตได้จากเชื้ออีโคไล (E. coli) และยีสต์ เนื่องจากมีการเติบโตอย่างรวดเร็วและมีต้นทุนต่ำ เชื้ออีโคไลจึงต้องผ่านกระบวนการปลายน้ำที่ซับซ้อน

ภาพรวมของการประมวลผลปลายน้ำ:

การชำระอินซูลินของมนุษย์แบบรีคอมบิแนนท์จากอินคลูชันบอดีของ E. coli เกี่ยวข้องกับขั้นตอนต่างๆ มากมาย เช่น การกู้คืน การล้าง การทำให้ละลายและออกซิเดชัน การแยกส่วน การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์ การทำให้บริสุทธิ์ทางโครมาโทกราฟี การตกตะกอน การทำให้บริสุทธิ์ใหม่ การแยกส่วนด้วยเอนไซม์ และการกำหนดสูตร

Yaohai Bio-Pharma มีประสบการณ์มากมายในด้านการผลิตและการทำให้บริสุทธิ์อินซูลินแบบรีคอมบิแนนท์ ร่วมกับทีมผู้เชี่ยวชาญ เพื่อให้แน่ใจว่าการผลิตอินซูลินของคุณจะเสร็จสมบูรณ์ด้วยประสิทธิภาพสูง โดยอาศัยประสบการณ์จากโครงการหลายร้อยโครงการ Yaohai ได้สรุปอย่างสุภาพว่าควรปรับกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ปลายน้ำสำหรับอินซูลินของมนุษย์แบบรีคอมบิแนนท์ให้เหมาะสมที่สุดอย่างไร

การฟื้นฟูและล้างร่างกายแบบรวม:

เซลล์ถูกทำลายโดยใช้วิธีการทางกล (เช่น การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยแรงดันสูง) หรือการบำบัดด้วยไลโซไซม์ ตามด้วยบัฟเฟอร์สำหรับการล้าง (ที่มียูเรีย ไทรทันเอ็กซ์-100 เป็นต้น) เพื่อกำจัดสิ่งเจือปน ในระหว่างการล้าง จำเป็นต้องปรับพารามิเตอร์ให้เหมาะสมเพื่อให้แน่ใจว่าโปรตีนมีคุณภาพในขณะที่ควบคุมต้นทุน

การทำให้ละลายและออกซิเดชันของ Inclusion Body:

สารทำให้เสื่อมสภาพที่มีความเข้มข้นสูง (เช่น กัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์และยูเรีย) ใช้ในการละลายอินคลูชันบอดี โดยเติมไดไธโอไทรทอลหรือ β-เมอร์แคปโตเอธานอลลงไปเพื่อป้องกันการเกิดพันธะไดซัลไฟด์ที่ไม่ถูกต้อง ค่า pH และอุณหภูมิส่งผลกระทบอย่างมากต่อปฏิกิริยาการละลายและออกซิเดชัน

การแยกและการแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์:

การแยกไซยาโนเจนโบรไมด์ใช้เพื่อกำจัดกรดอะมิโนเริ่มต้นที่ปลาย N แต่อาจทำให้เกิดพิษและความจำเพาะต่ำได้ การแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์จะกำจัดรีเอเจนต์ที่เป็นอันตรายออกโดยใช้การไดอะไลซิส การกรองด้วยอัลตราฟิลเตรชัน หรือโครมาโทกราฟีแบบแยกตามขนาด โดยจะทำการไดอะไลซิส การกรองด้วยอัลตราฟิลเตรชัน หรือการแยกตามขนาด

การทำให้บริสุทธิ์และการตกตะกอนด้วยโครมาโทกราฟี:

มีการใช้เทคนิคโครมาโตกราฟีหลายวิธีในการทำให้บริสุทธิ์อินซูลิน ได้แก่ โครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์ โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน โครมาโตกราฟีเฟสย้อนกลับ โครมาโตกราฟีแบบปฏิสัมพันธ์แบบไม่ชอบน้ำ และโครมาโตกราฟีแบบแยกตามขนาด วิธีการตกตะกอน เช่น การตกตะกอนด้วยค่า pH และการตกผลึกสังกะสี ใช้เพื่อกำจัดสิ่งเจือปนและทำให้โปรตีนเข้มข้น

การฟื้นคืนชีพ:

โปรตีนที่ละลายได้จะถูกเจือจางในบัฟเฟอร์ฟื้นฟูสภาพเพื่อส่งเสริมการสร้างพันธะไดซัลไฟด์และการพับโปรตีนอย่างถูกต้อง โครมาโทกราฟีของเหลวและการไดอะไลซิสที่พับโปรตีนเป็นวิธีการที่ใช้ฟื้นฟูสภาพเช่นกัน

การแยกและการกำหนดสูตรด้วยเอนไซม์:

ทริปซินและคาร์บอกซิเปปไทเดส B ใช้ในการแยกซีเปปไทด์ ทำให้เกิดเฮเทอโรไดเมอร์อินซูลินที่ทำงานอยู่ ในขั้นสุดท้าย จะใช้การตกผลึกและการทำให้แห้งแบบแช่เยือกแข็งเพื่อกำจัดเกลือและบัฟเฟอร์ที่เหลือ เพื่อเตรียมสูตรที่เสถียร มีการเติมสารเติมแต่งเฉพาะ (เช่น สังกะสีและโปรตามีน) เพื่อตอบสนองความต้องการทางคลินิกที่แตกต่างกัน

สรุป:

การประมวลผลอินซูลินปลายน้ำจาก E. coli มีความซับซ้อน ในอนาคตควรเน้นที่การปรับปรุงขั้นตอนเหล่านี้ให้เหมาะสมที่สุดเพื่อการผลิตที่มีประสิทธิภาพและประหยัดเพื่อตอบสนองความต้องการและลดต้นทุน

นอกจากนี้ Yaohai Bio-Pharma ยังแสวงหาพันธมิตรระดับสถาบันหรือระดับบุคคลทั่วโลกอย่างแข็งขัน และเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใดๆ โปรดติดต่อเราได้ที่: [email protected]