กระบวนการผลิต eGFP mRNA

การผลิต mRNA ของ eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) เกี่ยวข้องกับเทคนิคทางชีววิทยาโมเลกุลชุดหนึ่งเพื่อสร้างโมเลกุล RNA ที่มีหน้าที่ซึ่งเข้ารหัสสำหรับการแสดงออกของ eGFP ในด้านของ eGFP mRNA Yaohai Bio-Pharma ได้สะสมประสบการณ์อันยาวนานในการตอบสนองความต้องการเฉพาะของลูกค้า ด้วยการใช้ประสบการณ์ของเรา เราได้สังเคราะห์ขั้นตอนการผลิต EGFP mRNA

1. การโคลนยีน eGFP:เพื่อให้ได้ลำดับยีนที่เข้ารหัสสำหรับ eGFP โดยทั่วไปยีนนี้จะถูกโคลนจากเวกเตอร์พลาสมิดที่มีอยู่ก่อนแล้วหรือสังเคราะห์ขึ้นโดยอาศัยลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ทราบ จากนั้นยีนที่โคลนจะได้รับการตรวจยืนยันผ่านการจัดลำดับเพื่อให้แน่ใจถึงความแม่นยำ
2. การเพิ่มประสิทธิภาพยีนเพื่อการแสดงออก:เพื่อการแสดงออกที่เหมาะสมที่สุดในระบบเป้าหมาย (เช่น เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม แบคทีเรีย หรือระบบการถอดรหัสในหลอดทดลอง) ยีน eGFP อาจต้องผ่านการปรับให้เหมาะสมของโคดอน ซึ่งเกี่ยวข้องกับการแทนที่โคดอนที่หายากในลำดับดั้งเดิมด้วยโคดอนที่ใช้บ่อยกว่าในสิ่งมีชีวิตโฮสต์ ซึ่งจะเพิ่มโอกาสในการแปลรหัสอย่างมีประสิทธิภาพ
3. ในหลอดทดลอง การเตรียมเทมเพลตการถอดเสียงเมื่อยีนที่ปรับให้เหมาะสมพร้อมแล้ว ยีนดังกล่าวจะถูกนำไปรวมเข้ากับเวกเตอร์ที่เหมาะสม ซึ่งมักจะเป็นพลาสมิด ซึ่งประกอบด้วยองค์ประกอบควบคุมที่จำเป็นสำหรับการถอดรหัส (เช่น ลำดับโปรโมเตอร์) พลาสมิดนี้ทำหน้าที่เป็นแม่แบบสำหรับการถอดรหัสในหลอดทดลอง
4. ในหลอดทดลอง การถอดความ:การใช้เทมเพลตพลาสมิดที่เตรียมไว้ จะดำเนินการถอดรหัสในหลอดทดลองเพื่อสังเคราะห์ mRNA ของ eGFP กระบวนการนี้เกี่ยวข้องกับการใช้เอนไซม์โพลีเมอเรสของ RNA ซึ่งจะจดจำลำดับโปรโมเตอร์และเริ่มการถอดรหัส ทำให้เกิดสาย RNA ที่เป็นส่วนเติมเต็มของเทมเพลต DNA ขึ้นอยู่กับการใช้งานที่ต้องการ mRNA อาจถูกปิดฝา โพลีอะดีไนเลต และ/หรือดัดแปลงเพื่อเพิ่มเสถียรภาพและประสิทธิภาพการแปล
5. การทำให้บริสุทธิ์และการควบคุมคุณภาพ:จากนั้นทำการทำให้บริสุทธิ์ mRNA ของ eGFP เพื่อกำจัดสิ่งปนเปื้อนทั้งหมด รวมถึง DNA โปรตีน และนิวคลีโอไทด์อิสระ วิธีการทำให้บริสุทธิ์อาจรวมถึงอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเจล โครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์ หรือการแยกด้วยลูกปัด หลังจากการทำให้บริสุทธิ์แล้ว จะมีการวิเคราะห์คุณภาพ mRNA รวมถึงความเข้มข้น ความบริสุทธิ์ และความสมบูรณ์ โดยใช้เทคนิคต่างๆ เช่น สเปกโตรโฟโตเมตรี UV-Vis และอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบเจล
6. การจัดเก็บและการจัดส่ง:โดยทั่วไปแล้ว mRNA ของ eGFP ที่ผ่านการทำให้บริสุทธิ์จะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำเพื่อรักษาเสถียรภาพ สำหรับการใช้งานในเชิงทดลอง mRNA สามารถส่งเข้าสู่เซลล์ได้โดยใช้หลากหลายวิธี เช่น การใช้ไฟฟ้า การดูดกลืน หรือเวกเตอร์ไวรัส ขึ้นอยู่กับการใช้งานเฉพาะและประเภทของเซลล์เป้าหมาย
7. การแสดงออกและการตรวจสอบเมื่อเข้าไปในเซลล์แล้ว mRNA ของ eGFP จะถูกแปลเป็นโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่ได้รับการปรับปรุง ซึ่งสามารถมองเห็นได้โดยใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ วิธีนี้ช่วยให้สามารถตรวจยืนยันการผลิต การส่งมอบ และการแสดงออกของ mRNA ที่ประสบความสำเร็จได้

โดยสรุป การผลิต mRNA ของ eGFP เกี่ยวข้องกับการโคลนยีน การปรับให้เหมาะสมสำหรับการแสดงออก การเตรียมเทมเพลตการถอดรหัสในหลอดทดลอง การดำเนินการปฏิกิริยาการถอดรหัส การทำให้ mRNA ที่ได้บริสุทธิ์ และในที่สุดส่งมอบให้แก่เซลล์เพื่อการแสดงออกและการตรวจยืนยัน

นอกจากนี้เรายังกระตือรือร้นในการแสวงหาพันธมิตรระดับสถาบันหรือรายบุคคลทั่วโลก เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใด ๆ โปรดติดต่อเรา: [email protected]