กระบวนการผลิตของ eGFP mRNA

การผลิต mRNA ของ eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) นั้นเกี่ยวข้องกับชุดของการใช้เทคนิคชีวโมเลกุลเพื่อสร้างโมเลกุล RNA ที่ทำงานได้ซึ่งเข้ารหัสสำหรับการแสดงออกของ eGFP ในด้านของ mRNA eGFP Yaohai Bio-Pharma มีประสบการณ์มากมายในการตอบสนองความต้องการเฉพาะของลูกค้า โดยอาศัยประสบการณ์ของเรา เราได้รวบรวมกระบวนการสำหรับการผลิต mRNA EGFP

1. การโคลนยีน eGFP : เพื่อให้ได้ลำดับยีนที่เข้ารหัสสำหรับ eGFP ยีนนี้มักจะถูกโคลนมาจากพลาสมิดเวกเตอร์ที่มีอยู่แล้ว หรือสังเคราะห์อย่างเทียมตามลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ทราบแล้ว ยีนที่โคลนมาแล้วจะถูกตรวจสอบผ่านการลำดับเพื่อให้มั่นใจในความแม่นยำ
2. การปรับแต่งยีนสำหรับการแสดงออก : เพื่อการแสดงออกที่เหมาะสมที่สุดในระบบเป้าหมาย (เช่น เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม แบคทีเรีย หรือระบบการถอดรหัสพันธุกรรมในหลอดทดลอง) ยีน eGFP อาจผ่านกระบวนการปรับแต่งโคดอน ซึ่งเกี่ยวข้องกับการแทนที่โคดอนที่พบน้อยในลำดับต้นฉบับด้วยโคดอนที่ใช้งานบ่อยกว่าในสิ่งมีชีวิตโฮสต์ เพิ่มโอกาสในการแปลรหัสอย่างมีประสิทธิภาพ
3. ในหลอดทดลอง การเตรียมแม่พิมพ์การถอดรหัส : เมื่อยีนที่ได้รับการปรับแต่งพร้อมแล้ว จะถูกรวมเข้ากับเวกเตอร์ที่เหมาะสม เช่น พลาสมิด ซึ่งประกอบด้วยองค์ประกอบควบคุมที่จำเป็นสำหรับการถอดรหัส (เช่น ลำดับโปรเมอเทอร์) พลาสมิดนี้จะทำหน้าที่เป็นแม่พิมพ์สำหรับการถอดรหัสในหลอดทดลอง
4. ในหลอดทดลอง การถอดรหัส : การทำ in vitro transcription โดยใช้พลาสมิดที่เตรียมไว้เป็นต้นแบบเพื่อสังเคราะห์ eGFP mRNA กระบวนการนี้เกี่ยวข้องกับการใช้เอนไซม์ RNA polymerase ซึ่งสามารถจำแนกลำดับโปรเมอเตอร์และเริ่มต้นการทำทรานสคริปชัน สร้างสาย RNA ที่ตรงข้ามกับต้นแบบ DNA ขึ้นมา ขึ้นอยู่กับการใช้งานที่ต้องการ mRNA อาจถูกเพิ่มหมวก (capped) เพิ่ม poly-A tail และ/หรือปรับเปลี่ยนเพื่อเพิ่มความเสถียรและการแปลรหัสให้มีประสิทธิภาพมากขึ้น
5. การทำความสะอาดและการควบคุมคุณภาพ : mRNA ที่สังเคราะห์ได้จะถูกทำให้บริสุทธิ์เพื่อกำจัดสารปนเปื้อนใด ๆ รวมถึง DNA, โปรตีน และนิวคลีโอไทด์ฟรี วิธีการทำความสะอาดสามารถประกอบด้วยการแยกด้วยเจลไฟฟ้ากระแส, โครมาโทกราฟีแบบคอลัมน์ หรือการแยกโดยใช้บีด หลังจากการทำให้บริสุทธิ์ mRNA จะถูกวิเคราะห์เพื่อตรวจสอบคุณภาพ เช่น ความเข้มข้น ความบริสุทธิ์ และความสมบูรณ์ โดยใช้เทคนิคเช่น UV-Vis spectrophotometry และการแยกด้วยเจลไฟฟ้ากระแส
6. การเก็บรักษาและการส่งมอบ : mRNA ของ eGFP ที่ผ่านการ提纯มักจะเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิต่ำเพื่อรักษาความเสถียร ในทางทดลอง mRNA สามารถส่งเข้าสู่เซลล์ได้หลายวิธี เช่น การใช้ไฟฟ้า (electroporation), การใช้สารตัวกลางแบบไขมัน (lipofection) หรือเวกเตอร์ไวรัส โดยขึ้นอยู่กับการใช้งานและความเหมาะสมของชนิดเซลล์เป้าหมาย
7. การแสดงออกและการตรวจสอบ : เมื่อเข้าสู่ภายในเซลล์ mRNA ของ eGFP จะถูกแปลงเป็นโปรตีนเรืองแสงสีเขียวที่ได้รับการปรับปรุง ซึ่งสามารถมองเห็นได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ทำให้สามารถยืนยันการผลิต การส่งมอบ และการแสดงออกของ mRNA ได้อย่างสำเร็จ

สรุปแล้ว การผลิต mRNA ของ eGFP ประกอบด้วยกระบวนการโคลนยีน ปรับแต่งให้เหมาะสมสำหรับการแสดงออก เตรียมเทมเพลตสำหรับการถอดรหัสในหลอดทดลอง ทำการถอดรหัส แยกและทำความสะอาด mRNA ที่ได้ และสุดท้ายส่งเข้าสู่เซลล์เพื่อการแสดงออกและการตรวจสอบ

เราได้ดำเนินการค้นหาพันธมิตรระดับโลกทั้งหน่วยงานหรือบุคคลทั่วไปอย่างแข็งขัน เราเสนอค่าตอบแทนที่แข่งขันได้มากที่สุดในอุตสาหกรรม หากคุณมีคำถามใด ๆ กรุณาติดต่อเราได้โดยตรง: [email protected]