mRNA se sintetizira z in vitro transkripcijo (IVT) iz linearizirane plazmidne DNA (pDNA). Med postopkom IVT nastanejo tudi nekateri stranski produkti, vključno z dvojnoverižno RNA (dsRNA), ki je opredeljena kot glavni sprožilec prirojene imunske poti. Ključnega pomena je odstranitev nečistoč in doseganje visokih donosov čista mRNA za in vitro/vivo raziskave mRNA in terapevtske aplikacije.
Yaohai Bio-Pharma je vzpostavila nabor tehnologij za sintezo mRNA, ki jih zagotavlja zelo čista mRNA, kot so zasnova in optimizacija zaporedja, IVT, čiščenje, liofilizacija in inkapsulacija lipidnih nanodelcev (LNP). Vsi izdelki so izdani v skladu s strogimi standardi nadzora kakovosti. Afinitetna kromatografija (AC), ki temelji na močni in selektivni interakciji med 3′ poliA repom mRNA s stacionarno fazo oligo dT, je učinkovita in razširljiva strategija čiščenja za mRNA.
Rezultat
| Izdelek |
Prilagojena zelo čista mRNA
|
| dolžina |
100~10,000 nukleotidov |
| Vsebnost RNA |
100 µg~10 mg (OD260) |
| Čistost |
A260 / A280 |
| Identifikacija in čistost |
Elektroforeza v agaroznem gelu (AGE)
Kapilarna elektroforeza (CE)
|
| Omilitev |
Voda brez RNaze (tekočina) |
| Dostava |
Ladja s suhim ledom; ali pod temperaturo okolja |
| skladiščenje |
● Tekočina, pri -20°C ali manj
● Liofiliziran prašek, pri 4°C
|
| uporaba |
razvoj formulacije LNP,
Testi na osnovi celic, poskusi na živalih
|
Druge prilagodljive možnosti
| 5' Cap |
● Neobremenjeno
● Cap0, so-capped
● Cap1, so-capped
● Cap1, encimsko zapiranje
|
| 5' UTR/3' UTR |
● Zaporedje Nature UTR
● Mutant/skonstruirano UTR zaporedje
|
| 3' PolyA rep |
● 100A ~120A rep (priporočeno)
● Segmentiran poliA rep
● Drugi rep po meri
|
| Modificirani nukleozidi |
● Nespremenjene baze,
● psevdouridin (Ψ),
● N1-metilpsevdouridin (N1Ψ),
● 5-metilcitozin (m5C),
● 5-metiluridin (m5U),
● 5-metoksiuridin (5moU),
● 2-tiouridin (s2U),
● 2'-O-metil-U
● drugi
|
Študija primera
Razvili smo večstopenjski postopek čiščenja s kromatografijo in pripravili mRNA z visoko čistostjo in celovitostjo (>95 %).
Slika. Analiza mRNA z visoko čistostjo (>98 %)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
