Danes je Yaohai tako vznemirljiv, da deli svoj in vitro transkriptni protokol za dolgo RNK. To je učinkovita strategija, ki jo znanstveniki pogosto uporabljajo za proizvodnjo RNK v laboratoriju. Na ta način lahko raziskovalci proizvedejo precej veliko število dolgih RNA - nekaj bistvenega pomena za študij na različnih bioloških področjih. Tukaj nudimo vodnik po korakih za pripravo dolgih RNA s transkripcijo in vitro. Govorili bomo tudi o tem, kako bi lahko izboljšali proces, in poskušali obravnavati nekatere težave, s katerimi se srečujete pri sintezi dolge RNK.
Za transkripcijo in vitro je potrebnih več bistvenih komponent, zlasti dolga RNA. Zagotoviti boste morali encim, imenovan RNA polimeraza, pisalni material v obliki nukleotidnih trifosfatov (NTP), pufer za pomoč pri reakciji in nekaj predloge DNK. Kako to narediti korak za korakom, najdete podroben vodnik tukaj:
Več dejavnikov je zelo pomembnih za dobro delovanje sinteze RNK. Predvsem je pomembna količina magnezijevih ionov v samem pufru. RNA polimeraza potrebuje precejšnjo količino magnezija, da podpira pravilno interakcijo s šablono DNA in kasnejše zvijanje RNA. Drugi pomemben vidik, ki ga je treba upoštevati, je koncentracija predloge DNK. Natančneje, imeti morate dovolj reakcije šablone DNK, da dobite dobre donose RNK.
Dolga RNA bo seveda prišla s svojim nizom težav. Da so te težave lahko povezane z razpadom RNA, vplivajo na to, kako se RNA zvija, in nastajanje struktur, ki potencialno motijo sintetiziranje RNA. Eden od načinov za reševanje teh izzivov je prilagoditev medpomnilnika, ki ga uporabljate. Za bolj celovito strukturo RNK lahko raziskovalci dodajo različne posebne kemikalije, kot sta DTT in p-merkaptoetanol, ki pomagajo RNK pravilno zložiti in preprečijo, da bi se zlepila ali strdila.
Poleg tega niso vsi dolgi tipi RNA enaki in nekateri morda zahtevajo alternativne metode sinteze. Obstajajo posebne funkcije, ki bi jih raziskovalci morda morali dodati v RNA, na primer dodajanje 5 kapice ali repa Poly-A. Če je to potrebno (kot je pojasnjeno pozneje), morajo raziskovalci vključiti druge encime, kot sta gvanililtransferaza in poli(A)polimeraza. Izbrati je treba tudi ustrezen encim polimerazo RNA, ki jim naravno omogoča proizvodnjo več RNA. Takoj, ko bo treba sintetizirati dolgo RNK, bomo morali identificirati najboljše stanje.
Prepis dolgih RNA in vitro Obstaja več ključnih uporab za protokol prepisa dolgega RNA in vitro v več raziskavah, testih in terapevtskih prizadevanjih. Znanstvenikom pomaga razumeti strukturo RNK, način njenega delovanja in kako lahko s sodobnimi tehnologijami spreminjajo gene. Več drugi dan – odkritje različnih bolezni in njihovih terapevtikov, kot so zelo aktualne terapije z RNK – naj verjamemo, kako koristna je lahko ta tehnologija branja v tehnologiji za medicino.
Uporaba tega protokola ima veliko prednosti. Metoda, ki temelji na elektroforezi, je na splošno najučinkovitejši in stroškovno najučinkovitejši način za proizvodnjo velikih količin dolge RNA. Poleg kakovosti RNA je pomemben dejavnik za raziskovalce tudi dober izkoristek, ki jim pomaga pri raziskavah, zlasti če potrebujejo velike količine RNA za poskuse zaradi velikega vhodnega materiala na začetku. Poleg tega je in vitro transkripcija za dolgo RNA običajno natančnejša in ponovljiva kot kemična sinteza ali celična sinteza RNA.
Yaohai BioPharma je 10 najboljših mikrobnih CDMO, ki vključuje in vitro transkriptni protokol za dolgo RNK in regulativne zadeve. Imamo sistem vodenja kakovosti, ki je v skladu z veljavnimi standardi GMP in svetovnimi predpisi. Naša ekipa regulativnih strokovnjakov je vešča globalnih regulativnih okvirov za pospešitev bioloških izstrelitev. Zagotavljamo sledljive proizvodne procese kakovostnih izdelkov ter skladnost s pravili ameriške FDA in EU EMA. Zadovoljna sta tudi avstralska TGA in kitajska NMPA. Yaohai BioPharma je uspešno opravila presojo na kraju samem kvalificirane osebe Evropske unije (QP) za naš sistem kakovosti GMP in naš proizvodni obrat. Poleg tega smo opravili prve certifikacijske presoje sistema vodenja kakovosti ISO9001, sistema vodenja okolja ISO14001 in sistema vodenja varnosti in zdravja pri delu ISO45001.
Yaohai Bio-Pharma, 10 najboljših proizvajalcev bioloških izdelkov, je specialist za mikrobno fermentacijo. Vzpostavili smo napreden obrat, ki je opremljen s sodobno opremo in močnimi proizvodnimi zmogljivostmi RD. Imamo pet proizvodnih linij zdravilnih učinkovin, ki so v skladu z zahtevami GMP za mikrobno fermentacijo in čiščenje, ter dve polnilni liniji, ki sta avtomatizirani za vložke, viale in napolnjene injekcijske brizge. Razpoložljive tehtnice za fermentacijo se razlikujejo od 100L do 500L, 1000L in 2000L. Protokol prepisa in vitro za dolgo RNK za viase je 1 ml do 25 ml, medtem ko specifikacije za polnjenje napolnjenih injekcijskih brizg in kartuš zajemajo 1–3 ml. Naša proizvodna delavnica je skladna s standardom cGMP in zagotavlja stalno dobavo kliničnih vzorcev ter komercialnih izdelkov. Naš obrat proizvaja velike molekule, ki se pošiljajo po vsem svetu.
Yaohai Bio-Pharma ima izkušnje s proizvodnjo bioloških zdravil, ki so ustvarjena iz mikroorganizmov. Ponujamo prilagojene rešitve RD kot tudi proizvodne storitve, hkrati pa zmanjšujemo morebitna tveganja. Delali smo z različnimi tehnikami, kot so rekombinantne celične podenote, cepiva (vključno s peptidi), rastni faktorji, hormoni in in vitro transkriptni protokol za dolgo RNK. Smo specialist za številne mikroorganizme, kot so zunajcelično in znotrajcelično izločanje kvasovk (donos do 15 g/L) ter intracelularno topne bakterije in inkluzijska telesca (donos do 10 g/L). Razvili smo tudi fermentacijsko platformo BSL-2 za ustvarjanje bakterijskih cepiv. Imamo izkušnje pri izboljševanju proizvodnih procesov, s čimer povečujemo donose in zmanjšujemo stroške. Imamo visoko učinkovito tehnološko ekipo, ki zagotavlja pravočasno in kakovostno izvedbo projektov. To nam pomaga, da vaše izdelke, ki so unikatni, hitreje predstavimo na trgu.
Yaohai Bio-Pharma je vodilni na področju protokola za prepis in vitro za dolgo RNK CDMO. Naš glavni poudarek je bil proizvodnja mikrobnih cepiv in terapevtikov za zdravljenje hišnih ljubljenčkov, ljudi in veterinarjev. Imamo vrhunske RD in proizvodne tehnološke platforme, ki pokrivajo celoten proizvodni proces od inženiringa mikrobnih sevov do obdelave celične banke in oblikovanja metod do klinične in komercialne proizvodnje, s čimer zagotavljamo uspešno dostavo najnaprednejših rešitev. Nabrali smo ogromno znanja na področju biopredelave mikrobov. Več kot 200 projektov je bilo uspešno zaključenih in našim strankam pomagamo pri izpolnjevanju predpisov, kot so predpisi ameriške FDA in EU EMA. Pomagamo jim tudi pri navigaciji po Avstraliji TGA in Kitajski NMPA. Zaradi izkušenj in strokovnega znanja se lahko hitro odzovemo na zahteve trga in ponudimo prilagojene storitve CDMO.