Раскрытие оптимальной дозировки репортерной РНК eGFP

В молекулярной биологии и биотехнологии улучшенный зеленый флуоресцентный белок (eGFP) стал основным репортерным геном из-за его способности производить яркую зеленую флуоресценцию при 509 нм. Этот белок, первоначально выделенный из медузы Aequorea victoria, является прямым маркером обнаружения в культурах клеток млекопитающих, облегчая мониторинг и оптимизацию эффективности трансфекции. Однако возникает вопрос: какова оптимальная дозировка репортерной РНК eGFP для достижения желаемых уровней экспрессии?

Исследования показали, что эффективность репортерной РНК eGFP в значительной степени зависит от ее дозировки, особенно в контексте систем кольцевой РНК (circRNA) и самоусиливающейся мРНК (saRNA). Исследования, проведенные командой Катрин Ремаут в исследовательской группе наномедицины Гентского университета, выявили сложную взаимосвязь между дозировкой saRNA и эффективностью ее трансляции в клетках сетчатки. Они обнаружили, что низкие дозы saRNA, ниже порога для активации врожденного иммунитета, способствуют эффективной экспрессии белка. Это подчеркивает важность точного контроля дозировки для использования полного потенциала репортерной РНК eGFP.

В практических приложениях обычно используемые концентрации eGFP мРНК могут варьироваться от микрограммов (мкг) до нанограммов на микролитр (нг/мкл). Например, в экспериментах по трансфекции было показано, что дозы от 0.05 мкг до 0.5 мкг eGFP мРНК дают значительные уровни экспрессии в различных типах клеток, причем в некоторых случаях процент положительных клеток достигает 99-100%. Примечательно, что при дозах ниже 0.1 мкг saRNA демонстрирует превосходные уровни экспрессии по сравнению с линейной мРНК, демонстрируя ее преимущество самоусиления.

Универсальность репортерной РНК eGFP заключается не только в ее яркой и стабильной флуоресценции, но и в ее адаптивности к различным экспериментальным установкам. Исследователи могут точно настраивать дозировку в соответствии со своими конкретными потребностями, обеспечивая точный контроль над уровнями экспрессии генов. Эта особенность делает eGFP бесценным инструментом для изучения функции генов, мониторинга судьбы клеток и оптимизации протоколов трансфекции.

В заключение следует отметить, что оптимальная дозировка репортерной РНК eGFP во многом зависит от экспериментального контекста и желаемых результатов. Тщательно выбирая подходящую дозу, исследователи могут использовать весь потенциал этого универсального репортерного гена, расширяя наше понимание молекулярных механизмов и стимулируя инновации в биотехнологии.

Yaohai Bio-Pharma — первая и крупнейшая биопрепарат, посвященный микробной системе экспрессии CRDMO в Большом Китае. Мы стремимся удовлетворять клинические и коммерческие потребности наших глобальных клиентов в биологических лекарствах, вакцинах и диагностике для людей и ветеринарии.

Мы также активно ищем институциональных или индивидуальных глобальных партнеров. Мы предлагаем самую конкурентоспособную компенсацию в отрасли. Если у вас есть какие-либо вопросы, пожалуйста, свяжитесь с нами: [email protected]