Процесс производства eGFP mRNA

Производство mRNA eGFP (Усиленный Зеленый Флуоресцентный Белок) включает серию молекулярно-биологических техник для создания функциональной РНК молекулы, которая кодирует для выражения eGFP. В области mRNA eGFP, Yaohai Bio-Pharma накопила обширный опыт удовлетворения специфических потребностей клиентов. Используя наш опыт, мы создали процесс производства EGFP mRNA.

1. Клонирование гена eGFP : Необходимо получить генную последовательность, кодирующую eGFP. Этот ген обычно клонируется из предварительно существующего плазмидного вектора или синтезируется искусственно на основе известной нуклеотидной последовательности. Клонированный ген затем проверяется через секвенирование для обеспечения точности.
2. Оптимизация гена для выражения : Для оптимального выражения в целевой системе (например, млекопитающих клетках, бактериях или системах транскрипции in vitro) ген eGFP может пройти оптимизацию кодонов. Это включает замену редких кодонов в исходной последовательности на более часто используемые в хозяине, увеличивая вероятность эффективного перевода.
3. В vitro Подготовка шаблона транскрипции : Как только оптимизированный ген готов, он встраивается в подходящий вектор, часто плазмиду, содержащую регуляторные элементы, необходимые для транскрипции (например, промоторную последовательность). Эта плазмида служит шаблоном для транскрипции in vitro.
4. В vitro Транскрипция : С помощью подготовленного плазмидного шаблона проводится in vitro транскрипция для синтеза mRNA eGFP. Этот процесс включает использование ферментов РНК-полимераз, которые распознают промоторную последовательность и инициируют транскрипцию, производя комплементарную цепочку РНК к ДНК-шаблону. В зависимости от желаемого применения, мРНК может быть закрыта колпачком, полимеризована полиаденилатом и/или модифицирована для повышения устойчивости и эффективности трансляции.
5. Очистка и контроль качества : Синтезированная мРНК eGFP затем очищается для удаления любых загрязнителей, включая ДНК, белки и свободные нуклеотиды. Методы очистки могут включать гель-электрофорез, колонную хроматографию или разделение на основе бусинок. После очистки мРНК анализируют на качество, включая концентрацию, чистоту и целостность, используя методы, такие как УФ-ВИС спектрофотометрия и гель-электрофорез.
6. Хранение и доставка : Обычно очищенный mRNA eGFP хранится при низких температурах для поддержания стабильности. Для экспериментального использования mRNA можно доставлять в клетки различными методами, включая электропорацию, липофекцию или вирусные векторы, в зависимости от конкретного применения и типа целевой клетки.
7. Выражение и верификация : После проникновения внутрь клетки, mRNA eGFP транслируется в улучшенный зеленый флуоресцентный белок, который можно визуализировать с помощью флуоресцентной микроскопии. Это позволяет подтвердить успешное производство, доставку и выражение mRNA.

Подводя итог, производство mRNA eGFP включает клонирование гена, оптимизацию его для выражения, подготовку шаблона для транскрипции in vitro, выполнение реакции транскрипции, очистку полученного mRNA и, наконец, доставку его в клетки для выражения и верификации.

Мы также активно ищем глобальных партнеров среди организаций или частных лиц. Мы предлагаем самое конкурентоспособное вознаграждение в отрасли. Если у вас есть вопросы, не стесняйтесь обращаться к нам: [email protected]