Процесс производства мРНК eGFP

Производство мРНК eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) включает ряд методов молекулярной биологии для создания функциональной молекулы РНК, которая кодирует экспрессию eGFP. В области мРНК eGFP компания Yaohai Bio-Pharma накопила обширный опыт в удовлетворении конкретных потребностей клиентов. Используя наш опыт, мы синтезировали технологический процесс для производства мРНК EGFP.

1. Клонирование гена eGFP: Это для получения последовательности гена, кодирующей eGFP. Этот ген обычно клонируется из уже существующего плазмидного вектора или синтезируется искусственно на основе известной нуклеотидной последовательности. Затем клонированный ген проверяется посредством секвенирования для обеспечения точности.
2. Оптимизация генов для экспрессии: Для оптимальной экспрессии в целевой системе (например, клетках млекопитающих, бактериях или системах транскрипции in vitro) ген eGFP может подвергаться оптимизации кодонов. Это подразумевает замену редких кодонов в исходной последовательности на более часто используемые в организме хозяина, что увеличивает шансы на эффективную трансляцию.
3. В пробирке Подготовка шаблона транскрипции: После того, как оптимизированный ген готов, он встраивается в подходящий вектор, часто плазмиду, содержащую регуляторные элементы, необходимые для транскрипции (например, последовательность промотора). Эта плазмида служит шаблоном для транскрипции in vitro.
4. В пробирке транскрипция: Используя подготовленную плазмидную матрицу, in vitro транскрипция выполняется для синтеза eGFP мРНК. Этот процесс включает использование ферментов РНК-полимеразы, которые распознают последовательность промотора и инициируют транскрипцию, создавая комплементарную цепочку РНК к матрице ДНК. В зависимости от желаемого применения мРНК может быть кэпирована, полиаденилирована и/или модифицирована для повышения стабильности и эффективности трансляции.
5. Очистка и контроль качества: Синтезированная мРНК eGFP затем очищается для удаления любых загрязнений, включая ДНК, белки и свободные нуклеотиды. Методы очистки могут включать гель-электрофорез, колоночную хроматографию или разделение на основе бусинок. После очистки мРНК анализируется на качество, включая концентрацию, чистоту и целостность, с использованием таких методов, как спектрофотометрия в УФ-видимом диапазоне и гель-электрофорез.
6. Хранение и доставка: Очищенная мРНК eGFP обычно хранится при низких температурах для поддержания стабильности. Для экспериментального использования мРНК может быть доставлена ​​в клетки с использованием различных методов, включая электропорацию, липофекцию или вирусные векторы, в зависимости от конкретного применения и типа целевой клетки.
7. Выражение и проверка: Попав внутрь клетки, мРНК eGFP транслируется в усиленный зеленый флуоресцентный белок, который можно визуализировать с помощью флуоресцентной микроскопии. Это позволяет проверить успешность производства, доставки и экспрессии мРНК.

Подводя итог, можно сказать, что производство мРНК eGFP включает клонирование гена, оптимизацию его для экспрессии, подготовку шаблона транскрипции in vitro, проведение реакции транскрипции, очистку полученной мРНК и, наконец, доставку ее в клетки для экспрессии и проверки.

Мы также активно ищем институциональных или индивидуальных глобальных партнеров. Мы предлагаем самую конкурентоспособную компенсацию в отрасли. Если у вас есть какие-либо вопросы, пожалуйста, свяжитесь с нами: [email protected]