Производство рекомбинантного белка: модифицированные штаммы E. coli

Escherichia coli (E. coli) сыграла значительную роль в производстве рекомбинантных белков в биофармацевтической промышленности, послужив первым вектором экспрессии для производства биологических лекарств. E. coli может похвастаться быстрым ростом, удобными генетическими манипуляциями и быстрым синтезом рекомбинантных белков, среди прочих преимуществ. Обширные модификации сделали E. coli оптимальным выбором для экспрессии белков, что привело к созданию различных сконструированных штаммов E. coli.

Yaohai Bio-Pharma специализируется на предоставлении комплексных услуг аутсорсинга для ферментации, очистки, разработки процесса формулирования и производства серии биофармацевтических препаратов с использованием систем экспрессии E. coli. Что касается обширного опыта Yaohai, мы подытожили, что четыре распространенных штамма E. coli используются для производства рекомбинантного белка, а также их особенности.

Штамм BL 21

Полученный из линии E. coli B, штамм BL21 лишен Lon-протеазы и внешней мембранной протеазы OmpT. Lon-протеаза в первую очередь разрушает экзогенные белки, тогда как OmpT в основном разрушает белки внеклеточного матрикса. Отсутствие этих двух ключевых протеаз может эффективно предотвратить деградацию рекомбинантных белков.

Оригами штамм

Штамм Origami, производный от E. coli K-12, имеет мутации в тиоредоксинредуктазе и глутатионредуктазе, которые способствуют образованию правильно сложенных белков, содержащих дисульфидные связи, и повышают растворимость белков. Штамм Origami, включая Origami, Origami 2 и Origami B, подходит для экспрессии активных белков, содержащих дисульфидные связи.

Перетасовка штамма

Штамм SHuffle конститутивно экспрессирует дисульфидную связь-изомеразу DsbC в цитоплазме, способствуя образованию правильных дисульфидных связей в окисленных белках. Он также служит молекулярным шапероном для сворачивания белка, помогая формировать правильную конформацию.

штамм Розетта

Штамм Rosetta дополняет E. coli тРНК, соответствующими редким кодонам, с целью улучшения уровня экспрессии экзогенных генов, особенно эукариотических генов, в прокариотических системах. Полученный из BL21 и несущий плазмиду pRARE, устойчивую к хлорамфениколу, он дополняет шесть тРНК, соответствующих редким кодонам (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC и GGA), изначально отсутствовавшим в E. coli, обеспечивая более «универсальную» экспрессию белка.

Заключение

Тремя основными факторами успешного производства рекомбинантных белков являются хозяин, вектор и условия культивирования. Основываясь на понимании физико-химических свойств рекомбинантного белка, уникальных преимуществ каждого штамма и конкретных потребностей эксперимента, следует выбрать наиболее подходящего хозяина. Кроме того, для усиления экспрессии белка следует оптимизировать такие факторы, как плазмидные векторы, температура и индукторы.

Yaohai Bio-Pharma также активно ищет институциональных или индивидуальных глобальных партнеров и предлагает самую конкурентоспособную компенсацию в отрасли. Если у вас есть вопросы, пожалуйста, свяжитесь с нами: [email protected]