Контроль качества и применение рекомбинантных белков

Контроль качества рекомбинантных белков имеет решающее значение для надежности и воспроизводимости экспериментальных данных. Каждый шаг, от проектирования до производственного процесса, требует строгих стратегий контроля качества.

Стратегии контроля качества

Промышленный сектор придерживается строгих стандартных рабочих процедур, в то время как академическое сообщество должно повышать профессиональные знания для улучшения воспроизводимости данных. Белки со специфическими биологическими применениями или биохимическими характеристиками требуют индивидуальных стратегий контроля качества (QC).

Сложные примеры и решения

Yaohai Bio-Pharma может похвастаться обширным опытом в производстве и очистке рекомбинантных белков, в сочетании с командой экспертов, что гарантирует, что ваше производство белков будет завершено с высокой чистотой. Используя наш опыт из сотен проектов, Yaohai любезно суммирует, как оптимизировать очистку белков.

Белки, связывающие нуклеиновые кислоты: Необходимы шаги по удалению нуклеиновых кислот, такие как нуклеазы или осаждение ПЭИ. Отношение A260нм/A280нм контролируется для обнаружения загрязнения нуклеиновыми кислотами.

Тяжелая цепь 1 мышиного ферритина для крио-ЭМ: Необходимо оптимизировать этапы очистки и добавить нуклеазы для снижения соотношения A260нм/A280нм и обеспечения чистоты белка.

Химерный белок человека dsRBEC: Для лизиса клеток используется буфер, содержащий мочевину, с последующей рефолдингом на колонке для получения функционально активных белков.

Белки, связывающие двухвалентные катионы: Во время экспрессии и очистки необходимо добавлять определенные двухвалентные катионы, а также следует избегать использования хелатирующих агентов.

Железо-серные белки: Следует избегать использования имидазола, чтобы предотвратить разрушение кластера [2Fe ± 2S], обеспечивая правильное сворачивание и функционирование белка.

Растворимый фрагмент LLT1: Мутантная конструкция оптимизирует образование дисульфидных связей и сворачивание белка, что приводит к получению стабильных и высокопродуктивных белков.

Кристаллизация киназы CLK1: Совместная экспрессия с λ-фосфатазой удаляет фосфаты из участков фосфорилирования, а эксклюзионная хроматография (SEC) и анионообменная хроматография используются для получения однородного CLK1 без гетерогенного фосфорилирования.

Белки для использования в качестве антигена: Оценка чистоты необходима для предотвращения загрязнения высокоиммуногенными белками. Для структурных эпитопных антител необходимо сохранить трехмерную конформацию антигена.

Белки, склонные к агрегации: Для ограничения проблем агрегации применяются такие стратегии, как скрининг различных штаммов и снижение температуры культивирования, а также разрабатываются стратегии быстрой очистки.

Удаление эндотоксинов: Такие методы, как хроматография с положительным зарядом и аффинная хроматография с поликатионным лигандом, удаляют эндотоксины, гарантируя, что уровни ЛПС будут ниже пределов применения.

Белковые комплексы: Субъединицы экспрессируются отдельно и собираются in vitro или коэкспрессируются для формирования функциональных комплексов. Целостность комплекса оценивается по однородности и молярной массе.

Заключение

Производство белка начинается со стратегического проектирования, учитывающего биохимические особенности и применение. Во время экспрессии, очистки и контроля качества условия и методы оптимизируются для стабильности, отсутствия агрегации и нативного состояния. Очищенные белки служат различным последующим применениям, таким как биофизическая характеристика.

Yaohai Bio-Pharma также активно ищет институциональных или индивидуальных глобальных партнеров и предлагает самую конкурентоспособную компенсацию в отрасли. Если у вас есть вопросы, пожалуйста, свяжитесь с нами: [email protected]