Контроль качества и применения рекомбинантных белков

Контроль качества рекомбинантных белков критически важен для надежности и воспроизводимости экспериментальных данных. Каждый этап, от проектирования проекта до производственного процесса, требует строгих стратегий контроля качества.

Стратегии контроля качества

Промышленный сектор придерживается строгих стандартных операционных процедур, в то время как академическое сообщество должно улучшать профессиональные знания для повышения воспроизводимости данных. Белки с определенными биологическими применениями или биохимическими характеристиками требуют специализированных стратегий контроля качества (КЧ).

Сложные примеры и решения

Yaohai Bio-Pharma обладает обширным опытом в производстве и очистке рекомбинантных белков, а также командой экспертов, что гарантирует высокую чистоту вашего белка. Опираясь на наш опыт сотен проектов, Yaohai любезно подводит итоги о том, как оптимизировать очистку белков.

Белки, связывающие нуклеиновые кислоты: Этапы удаления нуклеиновых кислот, такие как нуклеазы или осаждение ПЭИ, необходимы. Соотношение A260nm/A280nm отслеживается для обнаружения загрязнения нуклеиновыми кислотами.

Ферритин тяжелая цепь мыши для крио-ЭМ: Этапы очистки должны быть оптимизированы, и необходимо добавлять нуклеазы для снижения соотношения A260nm/A280nm и обеспечения чистоты белка.

Химерный белок Человеческий dsRBEC: Лизис клеток осуществляется с использованием буфера, содержащего уреа, за которым следует рефолдинг на колонке для получения функционально активных белков.

Белки, связывающие дивалентные катионы: Необходимо добавлять специфические дивалентные катионы во время экспрессии и очистки, а хелатирующие агенты следует избегать.

Железосульфурные белки: Имидазол следует избегать, чтобы предотвратить разрушение кластера [2Fe ± 2S], что обеспечит правильное складывание и функцию белка.

Растворимый фрагмент LLT1: Мутантный дизайн оптимизирует формирование дисульфидных связей и складывание белка, что приводит к стабильным белкам с высокой выходной характеристикой.

Кристаллизация киназы CLK1: Со-экспрессия с λ-фосфатазой удаляет фосфаты с фосфорилируемых участков, а гель-фильтрация (SEC) и катионный ионообмен используются для получения однородного CLK1 без неоднородной фосфориляции.

Белки для использования в качестве антигена: Оценка чистоты необходима для избежания загрязнения высокоиммуногенными белками. Для структурных эпитопных антител необходимо сохранять трёхмерную конформацию антигена.

Белки, склонные к агрегации: Используются стратегии, такие как скрининг различных штаммов и снижение температуры культивирования, чтобы ограничить проблемы агрегации, и разрабатываются быстрые методы очистки.

Удаление эндотоксинов: Методы, такие как положительно заряженная хроматография и хроматография аффинности поликационных лигандов, удаляют эндотоксины, обеспечивая уровень ЛПС ниже предельных значений применения.

Белковые комплексы: Подединицы выражаются отдельно и собираются in vitro или ко-выражаются для формирования функциональных комплексов. Целостность комплекса оценивается по гомогенности и молекулярной массе.

Заключение

Производство белков начинается со стратегического проектирования, с учетом биохимических характеристик и применений. Во время выражения, очистки и контроля качества условия и методы оптимизируются для обеспечения стабильности, нераспадаемости и природного состояния. Очищенные белки используются для различных последующих целей, таких как биофизическая характеристика.

Yaohai Bio-Pharma также активно ищет глобальных партнеров среди учреждений или частных лиц и предлагает наиболее конкурентоспособное вознаграждение в отрасли. Если у вас есть вопросы, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам: [email protected]