Оптимизация процесса очистки рекомбинантного человеческого инсулина

В последние годы рост числа больных диабетом обусловил спрос на инсулин, но доступный инсулин в дефиците. Эффективное, экономичное производство инсулина имеет решающее значение. В основном производимая с помощью Escherichia coli (E. coli) и дрожжей из-за быстрого роста и низкой стоимости, E. coli сталкивается со сложной последующей обработкой.

Обзор последующей обработки:

Очистка рекомбинантного человеческого инсулина из включений E. coli включает несколько этапов, включая восстановление, промывку, солюбилизацию и окисление, расщепление, замену буфера, хроматографическую очистку, осаждение, ренатурацию, ферментативное расщепление и формулирование.

Yaohai Bio-Pharma может похвастаться обширным опытом в производстве и очистке рекомбинантного инсулина, в сочетании с командой экспертов, что гарантирует, что ваше производство инсулина будет завершено с высокой эффективностью. Используя наш опыт из сотен проектов, Yaohai любезно суммирует, как оптимизировать процесс очистки ниже по течению для рекомбинантного человеческого инсулина.

Восстановление и промывание включенных тел:

Клетки разрушаются с помощью механических методов (таких как ультразвуковая обработка, гомогенизация под высоким давлением) или обработки лизоцимом, после чего следует промывка буферами (содержащими мочевину, Triton X-100 и т. д.) для удаления примесей. Во время промывки необходимо оптимизировать параметры, чтобы обеспечить качество белка при одновременном контроле затрат.

Растворение и окисление телец включения:

Для растворения включений используются высококонцентрированные денатуранты (такие как гидрохлорид гуанидина и мочевина), а для предотвращения образования неправильных дисульфидных связей добавляют дитиотреитол или β-меркаптоэтанол. pH и температура существенно влияют на реакции растворения и окисления.

Расщепление и обмен буфером:

Расщепление бромциана используется для удаления N-концевой инициирующей аминокислоты, но оно вызывает проблемы с токсичностью и низкой специфичностью. С помощью диализа, ультрафильтрации или гель-хроматографии буферный обмен удаляет вредные реагенты для подготовки к последующим операциям.

Хроматографическая очистка и осаждение:

Для очистки инсулина используются многочисленные хроматографические методы, включая аффинную хроматографию, ионообменную хроматографию, обращенно-фазовую хроматографию, гидрофобную хроматографию и эксклюзионную хроматографию. Методы осаждения, такие как осаждение pH и кристаллизация цинка, используются для удаления примесей и концентрирования белков.

Ренатурация:

Солюбилизированный белок разбавляется в буфере ренатурации для обеспечения правильного образования дисульфидных связей и сворачивания белка. Жидкостная хроматография сворачивания белка и диализ также являются методами, используемыми для ренатурации.

Ферментативное расщепление и формулирование:

Трипсин и карбоксипептидаза B используются для расщепления C-пептида, образуя активный гетеродимер инсулина. Наконец, кристаллизация и лиофилизация используются для удаления остаточных солей и буферов, готовя стабильную формулу. Специальные добавки (такие как цинк и протамин) добавляются для удовлетворения различных клинических потребностей.

Вывод:

Последующая переработка инсулина из E. палочки является сложным. В будущем следует сосредоточиться на оптимизации этих шагов для эффективного, экономичного производства, чтобы удовлетворить спрос и сократить расходы.

Yaohai Bio-Pharma также активно ищет институциональных или индивидуальных глобальных партнеров и предлагает самую конкурентоспособную компенсацию в отрасли. Если у вас есть вопросы, пожалуйста, свяжитесь с нами: [email protected]